【摘 要】
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本课题以百合科玉簪属植物紫花玉簪为研究对象,对其根部内生真菌进行分离、纯化及鉴定,并以总抗氧化能力,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）法和2,2’-联氮双-（3-乙基苯并噻唑林-6-磺酸）二胺盐（ABTS+）法为指标,考察了紫花玉簪根部内生真菌菌丝体醇提物抗氧化潜力。同时,选用犬小孢子菌、石膏样小孢子菌和须癣毛癣菌3种病原真菌为供试菌,以菌丝生长速率法研究了紫花玉簪根部内生真菌发酵液抑真菌
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本课题以百合科玉簪属植物紫花玉簪为研究对象,对其根部内生真菌进行分离、纯化及鉴定,并以总抗氧化能力,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）法和2,2’-联氮双-（3-乙基苯并噻唑林-6-磺酸）二胺盐（ABTS+）法为指标,考察了紫花玉簪根部内生真菌菌丝体醇提物抗氧化潜力。同时,选用犬小孢子菌、石膏样小孢子菌和须癣毛癣菌3种病原真菌为供试菌,以菌丝生长速率法研究了紫花玉簪根部内生真菌发酵液抑真菌活性,并对进行发酵条件优化和抗真菌极性部位筛选,研究结果如下:1.通过组织分离法,共分离到13株紫花玉簪根部内生真菌,经分子生物学鉴定,分属6属,其中尖孢镰刀菌属一共7株,占总数的53.84%,为紫花玉簪内生真菌的优势菌属。2.13株内生真菌菌丝体醇提物均具有不同程度的抗氧化活性,其中Ho V1和Ho V4表现出较强的综合抗氧化活性:总抗氧化能力分别为63.46±0.26 U/g和66.05±0.71 U/g,DPPH自由基清除EC50分别为83.42±0.24μg/m L和59.13±0.78μg/m L,ABTS+自由基清除EC50分别为30.25±0.05μg/m L和24.66±0.65μg/m L;而Ho V8显示出优异的DPPH自由基清除活性(EC50=16.02μg/m L),优于同浓度的下的2,6-二叔丁基羟基甲苯（BHT）。同时,多酚含量测定显示,Ho V1、Ho V4多酚含量较高,分别为1.78±0.01 mg/g和2.38±0.04 mg/g,表明这两种真菌的抗氧化活性主要与其多酚含量有关;Ho V8虽然表现出强烈的抗氧化活性但其多酚含量并不显著,推测多酚成分可能不是其唯一的抗氧化活性来源。3.13株内生真菌发酵液中仅Ho V1、Ho V3、Ho V7、Ho V11四株对3种动物源病原真菌均表现出抑菌活性,具有广谱抑真菌活性,占总数的30.7%。其中Ho V3和Ho V7对三种病原真菌均显示出较高的抑制率,同时在这两株内生真菌的发酵液中也检测出较高总甾体含量（分别为5.63 mg/g和5.37 mg/g）,推测其良好的抗真菌活性与甾体成分相关。4.选择发酵液抑菌活性和菌丝体重量为指标进行综合考察,采用单因素和L9（34）正交实验法对Ho V7培养基的碳源、氮源和p H进行了优化,结果显示:乳糖为最佳碳源,蛋白胨为最佳氮源,其中乳糖的加入量对Ho V7内生真菌发酵产生最大影响,蛋白胨影响较小,而p H影响最小。当乳糖含量13%,蛋白胨含量10%,p H为8时达到最佳发酵条件。5.采用石油醚,氯仿,乙酸乙酯对紫花玉簪内生真菌Ho V7发酵液进行梯度萃取,得到不同极性部位,并对其进行抗真菌活性及甾体含量考察。研究结果表明,Ho V7发酵液不同极性萃取物抑菌活性差异显著,其中氯仿部位和水部位具有广谱抗真菌活性,且含有较高含量的甾体成分,分别为120.15 mg/g和91.14 mg/g。氯仿部位总体效果优于水部位,其中对犬小孢子菌抑菌效果显著,最小抑菌浓度（MIC）为312.5μg/m L。
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