新疆部分地区牛支原体的血清学调查及病原分离鉴定

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为了初步了解牛支原体病的发生和感染情况。对235份牛血清用双抗体夹心ELISA方法,进行了牛支原体病的抗体检测。结果显示,检出牛支原体阳性血清37份,阳性率为15.7%。该结果表明,牛支原体病在调查地存在并且在部分地区感染率较高。采集阳性血清对应的鼻拭子,用PPLO培养基培养,盲传3代,发现有“煎蛋样”的菌落生长,挑取单个菌落再进行纯培养;纯培养物进行革兰氏染色,着色不良;姬姆萨染色,呈淡紫色;狄氏鉴别染色,呈现深蓝色中心。初步怀疑分离菌为牛支原体。对疑似牛支原体菌做进一步鉴定:生化反应鉴定:菌株对洋地黄皂苷敏感,发酵葡萄糖,不水解尿素和精氨酸,结果显示该菌符合牛支原体的生化特性。PCR鉴定:采用酚氯仿方法提取培养物的DNA,使用牛支原体16S rRNA通用引物进行PCR扩增,获得预期310bp大小的片段,该PCR扩增产物送测序公司测序,获得296bp大小的片段,用DNAStar软件进行该菌与GenBank上的牛支原体的16S rRNA序列的同源性比较。结果显示,该菌与GenBank中牛支原体株(登录号:NR-036946)、(登录号:AY526883)和(登录号:AF332753)16S rRNA序列的同源性很高,分别达到了98.6%,98.2%,97.5%。遗传进化分析表明,该分离株为独立株,与牛支原体(登录号:NR-036946)合为一支。
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