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目的:虽然现在人们的平均寿命都在逐年延长,但是癌症对人们健康的威胁日渐突出,目前已成为威胁我国城乡居民生活水平的第一位死因。已有很多报道表明维生素D可以通过调节多种癌基因的表达参与癌症的发生和发展的过程。所以,进一步探究维生素D对癌症的发生发展的分子机制能发现其干预的更多的潜在的靶点。组氨酸富集钙蛋白(histidine-rich calcium binding protein,HRC)是新发现的一种钙离子结合蛋白,其在细胞内维持钙平衡以及在钙信号的传导过程中发挥着极其重要的作用。本研究旨在于探讨维生素D对HRC的调节作用及维生素D在H460肺癌细胞中的抗迁移和抗增殖的潜在的作用机制。研究方法:体外实验的研究对象是H460肺癌细胞,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)、免疫印迹实验(western blotting)方法检测维生素D对H460肺癌细胞中HRC的表达的影响,实验分为CON组、CON+VitD组,并通过Transwell小室迁移实验、伤口愈合实验和MTS增殖实验来检测维生素D对H460肺癌细胞的迁移和增殖能力的影响。用表达载体(pcDNA3.1)构建HRC过表达质粒并转染H460肺癌细胞,使H460肺癌细胞过度表达HRC基因,实验分为Vector组、Vector组+VitD组、HRC组、HRC+VitD组。利用CRISPR-Cas9技术敲除H460肺癌细胞中的HRC基因,实验分为Vector组、Vector组+VitD组、Cas9HRC组、Cas9HRC+VitD组。通过transwell小室迁移实验、伤口愈合实验和MTS增殖实验探索过表达/敲除HRC后维生素D对H460肺癌细胞迁移和增殖能力的影响。体内实验选用了12只体重在15-18g之间的SPF级雄性BALB/C裸鼠,将其随机分成4组:Vector组、Vector组+CCE组、HRC组、HRC+CCE组,通过裸鼠皮下成瘤实验检测胆维丁乳(CCE)对肿瘤大小的影响。免疫组化检测胆维丁乳(CCE)对裸鼠瘤体内HRC基因表达的影响。Tunnel凋亡检测胆维丁乳(CCE)对肿瘤组织内细胞凋亡的影响。通过染色质免疫沉淀(CHIP)和荧光素酶双报告检测方法分别检测VDR与HRC启动子区VDRE位点的结合的能力和calcitriol对HRC基因的转录活性的影响。结果:1、维生素D处理H460肺癌细胞24h后,与CON组相比,CON+VitD组的HRC的表达水平下降,H460肺癌细胞的迁移和增殖速率降低。2、HRC基因敲除后,与Vector组相比,Cas9HRC组H460细胞的迁移和增殖能力减弱。3、成功构建HRC过表达质粒。4、与VitD组相比,HRC+VitD组H460肺癌细胞的迁移和增殖速率增加。与HRC组相比较,HRC+VitD组H460肺癌细胞的迁移和增殖速率减慢,这说明维生素D能通过调节HRC影响H460肺癌细胞的迁移和增殖。5、体外成瘤实验结果显示,与CCE组相比,HRC+CCE组肿瘤的体积和重量都增加。与HRC组相比,HRC+CCE组的肿瘤的体积和重量都减小。Tunel凋亡检测结果与HRC组相比,HRC+CCE组的凋亡的肿瘤细胞增多,与CCE组相比,HRC+CCE组凋亡的肿瘤细胞减少,这些结果表明,在体内CCE能抑制肿瘤的增长。6、成功构建HRC-PGL3重组质粒。7、染色质免疫沉淀CHIP结果显示calcitriol处理组的H460肺癌细胞中VDR与HRC启动子区的VDRE位点的结合增多。荧光素酶双报告基因的检测结果显示,HRC-PGL3+calcitriol组萤火虫荧光素酶活性与肾素荧光素酶活性的比值低于HRC-PGL3组。结论:1、维生素D下调HRC的表达,抑制H460肺癌细胞的迁移和增殖。2、HRC基因敲除抑制H460肺癌细胞的迁移和增殖。3、维生素D能通过HRC影响H460肺癌细胞的迁移和增殖。4、维生素D通过结合HRC启动子的VDRE位点调控其转录活性。