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目的研究乳腺癌发生、发展过程中印迹抑癌基因NOEY2启动子区CpG岛Ⅰ和抑癌基因TIMP3启动子区的甲基化状态及其]mRNA的表达,一方面探讨NOEY2和TIMP3基因的甲基化与乳腺癌发生、发展的关系,进一步阐明乳腺癌发生的机制；另一方面为乳腺癌基因甲基化谱的选择提供参考,为乳腺癌的早期诊断、预防和治疗提供理论依据。方法1、DNA亚硫酸盐修饰、甲基化特异性PCR联合测序技术检测乳腺癌发生各阶段中NOEY2启动子区CpG岛Ⅰ和TIMP3启动子区的甲基化状态。2、实时定量PCR方法检测NOEY2及TIMP3mRNA在乳腺癌中的表达。3、秩和检验、等级相关分析基因甲基化与其：mRNA表达的相关性。4、x2检验分析NOEY2、TIMP3基因甲基化与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期、组织学分级等临床病理参数的关系。结果1、20例正常乳腺标本均同时扩增出NOEY2甲基化和非甲基化产物,呈部分甲基化：良性增生乳腺标本的完全甲基化率为6.7%(2/30)；不典型增生标本的完全甲基化率为15.4%(2/13)；原位癌标本的完全甲基化率为20%(4/20)；乳腺癌标本的完全甲基化率为32.6%(15/46)。2、30例乳腺癌标本中,9例NOEY2CpG岛Ⅰ完全甲基化的标本均存在NOEY2mRNA表达明显下调；其余21例NOEY2CpG岛Ⅰ部分甲基化的标本中,19例NOEY2mRNA表达下调,2例NOEY2mRNA表达上调。经统计学分析,NOEY2CpG岛Ⅰ完全甲基化的标本NOEY2mRNA的表达明显低于在部分甲基化标本中的表达,两组间比较,差异有统计学意义(p<0.05)。3、乳腺癌中NOEY2CpG岛Ⅰ完全甲基化与其乳腺癌患者的TNM分期(p=0.041<0.05)、组织学分级(p=0.035<0.05)有关,而与年龄、肿瘤大小、ER、PR等临床病理参数无相关性。4、20例正常乳腺、30例良性增生、13例不典型增生和20例原位癌标本均未发生TIMP3基因甲基化；乳腺癌标本的甲基化率为10.9%(5/46)。5、24例乳腺癌标本,5例TIMP3甲基化的标本TIMP3mRNA表达均明显下调；其余19例未甲基化的标本中,15例TIMP3mRNA表达下调,3例表达上调且均高于正常表达量的4倍,1例表达正常。经统计学分析,TIMP3甲基化的标本TIMP3mRNA表达明显低于未甲基化的标本,两组间比较,差异有统计学意义(p<0.05)。6、乳腺癌TIMP3基因甲基化与其患者肿瘤的TNM分期(p=0.0005<0.05)有关,而与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、组织学分级等临床病理参数间无关联。结论1、正常乳腺标本中NOEY2CpG岛Ⅰ未发生异常甲基化,而在良性增生、癌前病变、乳腺癌标本中检测到异常甲基化且甲基化率逐渐增高,提示NOEY2CpG岛Ⅰ异常甲基化存在于乳腺癌的早期阶段,与乳腺癌的发生、发展有关。2、乳腺癌中印迹抑癌基因NOEY2CpG岛Ⅰ异常甲基化与该基因mRNA的失表达相关,提示NOEY2CpG岛Ⅰ异常甲基化是其失活的重要机制之一。3、NOEY2CpG岛Ⅰ异常甲基化与乳腺癌患者肿瘤的TNM分期、组织学分级相关,表明NOEY2CpG岛Ⅰ异常甲基化在乳腺癌的进展中发挥一定作用。4、TIMP3基因甲基化仅发生在乳腺癌中,提示TIMP3基因甲基化发生在乳腺细胞癌变后,在乳腺癌发生的早期并未对其产生影响。5、乳腺癌中TIMP3基因甲基化与其mRNA失表达相关,提示甲基化是TIMP3基因失活的重要机制之一。6、TIMP3基因甲基化与乳腺癌患者肿瘤的TNM分期相关,表明TIMP3基因甲基化与乳腺癌的进展相关。7、甲基化仅导致部分乳腺癌中NOEY2、TIMP3基因表达下调,说明乳腺癌中NOEY2、TIMP3基因还存在除DNA甲基化外的其它失活机制。