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γ-癸内酯(γ-decalacton,GDL),又名丙位癸内酯,化学名称为γ-正己基丁内酯,天然存在于水果及发酵产品中。GDL因具有诱人的桃香味和低香气阈值,在食用香料及制药、化学合成等领域得到了广泛应用,人们对该产品的需求量日益增大,然而在自然界中尚未发现此香料的大量存在,而化学法生产的却是消旋体。用生物法生产的GDL具有天然等同的特点,目前国际市场也没有天然旋光性GDL产品供应,因此,用生物法生产GDL具有广阔的前景。本论文筛选获得了产GDL的耶鲁维亚解脂酵母(Yarrowia lipolytica),以不断提高GDL产量为目标进行了较为系统、完整的研究。采用基因组改组方法提高GDL产量,并对发酵条件进行优化,建立了菌体生长动力学模型和GDL生产动力学模型。为减少底物和产物对细胞的毒性提高GDL产量,以有机复合无机材料制备固定化细胞,提高了细胞的通透性和机械强度,延长了使用寿命。为进一步增加胞内外的物质交换,促进蓖麻油底物进入细胞及GDL产物的泌出,建立了生物转化的离子液体系。通过对影响GDL产量和ACO同工酶酶活因素分析,发现吡啶环具有较好的促进或刺激作用。对照了传统溶剂和超临界二氧化碳萃取法对GDL的提取效果。具体内容有以下几个方面:(1)根据GDL在碱性条件下与盐酸羟胺反应生成中间产物异羟肟酸,异羟肟酸可与三价铁反应生成有色络合物的显色反应原理,建立了准确性和重复性均很好的GDL分光光度检测法,检测范围为:0.125-8.14g L-1。基于该检测方法,建立了96孔微培养板高通量筛选方法,用96孔微培养板培养菌体,再对发酵液进行显色反应,用酶标仪检测吸光度,最终从4327个样本中,获得了215株产GDL菌株,其中产量最高为179mg L-1,经26S rRNA测序结果,该菌株确定为Yarrowia lipolytica。(2)以紫外诱变获得的正向突变株作为基因组改组的出发菌库,获得了原生质体制备和融合的最佳条件,采用递推式融合法,经过三轮融合,获得了产量最高且遗传稳定性较好的菌株G3-3.21,产量为3.75g L-1,是出发菌株的6.58倍。通过对正向突变株ACO酶活和GDL产量的比对分析,发现GDL的高产不仅要求ACO同工酶对长链底物降解能力较强,还需对中链和短链底物的降解偏弱,才有利于GDL的累积且能够在一定时间内维持此最高产量,不会在短时间内未来得及内环化又被进一步β-氧化了。(3)为提高GDL产量,采用田口设计法对8个因素进行优化,确定主要影响因素为麸皮、复合氮源和初始pH。然后采用响应面分析法对主要影响因素进一步优化,获得最优发酵条件,GDL产量达到4.767g·L-1。麦麸中烟酸的吡啶环对于GDL的生产可能有较好的促进作用。对Z703和G3-3.21的菌体生长动力学和产物形成动力学进行研究,其菌体生长模型分别为dXdd=0.309(1Xt15.2)X和XXdt=0.438(116.7)X,GDL生成动力学模型分别是dPdPdt=0.00105X和dt=0.00784X。(4)为减少底物和产物对细胞的毒性,采用固定化细胞转化技术,为提高通透性和机械强度,采用有机海藻酸钠复合无机凹凸棒石粘土固定化细胞,GDL产量达6.15g L-1,比游离细胞高1.32倍,且可重复使用3次。构建了生物相容性较好的离子液转化体系,增加了胞内外的物质交换,GDL产量达7.85g·L-1。与相同的阴离子相比,当阳离子为吡啶离子时,GDL产量和ACO酶活普遍高于咪唑离子;当阴离子为溴离子和硝酸离子时,GDL产量和ACO酶活均低于阴离子为四氟磷酸离子和六氟磷酸离子。(5)研究了游离细胞的破壁条件,对照未破壁发酵液,GDL产量提高14.06%。通过酸化和加热实验,证明本研究中所采用的耶氏酵母本身就具有内酯化能力,不需在萃取前,通过加热酸化将前体物4-羟基-癸酸人工内酯化成GDL。研究了固定化细胞离子液体系生物转化GDL的提取工艺,采用乙酸丁酯萃取法,萃取率最高达86.2%;采用超临界二氧化碳的最佳萃取率为91.7%。