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[研究目的]原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)目前是我国癌症的高发种类,在世界癌症中排名前五,每年由肝癌致死的人数高达50万。甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)是目前临床诊断上最常见的肿瘤标志物,被认为是诊断和发现原发性肝癌的重要手段。近年来研究发现微小RNA(microRNA,miRNA)对细胞的增殖、侵袭及转移等具有重要的调控作用。本实验室前期通过生物信息学的方法预测到miR-942在AFP的3’UTR区存在结合位点。本研究拟证实miR-942调控AFP基因的表达,并深入研究miR-942对肝癌发生和发展过程的分子调控机制,从而为肝癌的早期诊断及特异性治疗提供理论依据。[方法]一,通过生物信息学的方法预测到在AFP的3’UTR区存在miR-942的结合位点,因此我们选用miR-942作为研究对象。接着,将AFP 3’ UTR区域中能与miR-941结合的种子序列构建到荧光报告载体pcDNA3/EGFP中。利用荧光报告载体实验,在肝癌细胞系QGY-7703和PLC-PRF-5中验证miR-942对靶基因AFP的直接靶定调控作用;又通过Real-time PCR和Western blot实验方法检测了 miR-942对AFP mRNA和蛋白水平的影响。二,在肝癌细胞系QGY-7703、PLC-PRF-5细胞中,用MTT实验、平板克隆形成实验、Transwell迁移及侵袭实验检测miR-942对细胞活性、增殖、迁移及侵袭能力的影响。三,在肝癌细胞系QGY-7703、PLC-PRF-5细胞中,通过MTT实验、集落形成实验和Tanswell迁移及侵袭实验检测AFP对细胞活性、增殖、迁移及侵袭能力的影响。四,运用pA3M1/AFP过表达质粒并同样通过MTT实验、平板克隆形成实验、Transwell迁移及侵袭实验等验证AFP是否能挽救miR-942对肝癌细胞功能的抑制。[结果]生物信息学预测到在AFP的3’UTR区存在miR-942的结合位点。荧光报告载体实验表明,miR-942能够通过结合AFP的3’UTR区并抑制报告基因的表达;Real-time PCR和Western blot实验结果表明,过表达miR-942能降低肝癌细胞PLC-PRF-5中AFP mRNA和蛋白表达水平,而封闭miR-942则能升高AFP mRNA和蛋白水平。在细胞功能实验中,过表达miR-942能够抑制肝癌细胞活性、增殖及迁移和侵袭能力;而封闭miR-942可以增强肝癌细胞活性、增殖和迁移能力。过表达AFP促进细胞活性、增殖和迁移和侵袭能力;相反,降低肝癌细胞内AFP表达则抑制细胞活性、增殖、迁移及侵袭能力。另外,过表达AFP可以有效的挽救由过表达miR-942引起的细胞表型的变化。[结论]在肝癌细胞PLC-PRF-5和QGY-7703中,AFP能促进其活性、生长、迁移和侵袭。而miR-942可以直接结合AFP的3’UTR区并负性调控AFP的表达,从而抑制肝癌细胞的活性、生长、迁移和侵袭。阐明miR-942对AFP的负性调控作用是其对肝癌细胞恶性行为调控的机制之一。这使我们对肝癌的发生发展有了更深入的理解,同时也为临床上肝癌的诊断和治疗提供新的理论依据。