研究目的：p53是目前哺乳动物中最为重要的抑癌基因之一,超过一半以上的人类癌症中,p53都存在着突变或者缺失；UBE4B是近年来最新发现的E4泛素化因子,有研究证实,内源性UBE4B与p53和Hdm2存在相互作用,且能够负性调控p53的功能和稳定性。本文拟对乳腺癌中的UBE4B是否可以促进p53的泛素化和降解,进而抑制肿瘤细胞的凋亡、促进肿瘤的形成进行研究,以探讨UBE4B是否有可能成为乳腺癌治疗的新靶点。研究方法：收集乳腺癌病例新鲜组织,western blot观察乳腺癌组织细胞及周围正常乳腺组织细胞中UBE4B的蛋白水平,以及乳腺癌组织细胞中UBE4B和p53之间的蛋白水平关系,本课题使用乳腺癌细胞系MCF-7及SK-BR-3进行了泛素化实验、免疫共沉淀实验、凋亡实验及裸鼠成瘤实验等,最终证实在乳腺癌中UBE4B和p53存在着相互作用以及UBE4B可以负性调控p53的功能和稳定性。研究结果：一、UBE4B和p53在乳腺癌中的表达及UBE4B促进p53的泛素化水平Western blot结果显示,在乳腺癌组织中,UBE4B的蛋白水平显著高于乳腺癌周围正常组织,而且乳腺癌组织中,UBE4B和p53的蛋白水平也基本呈负相关；在MCF-7细胞中,过表达UBE4B及Hdm2明显促进了p53的泛素化水平。相反,当敲低细胞中UBE4B的蛋白表达后,p53的泛素化水平也随之降低。相似的情况也可以在SK-BR-3细胞中观察到。二、UBE4B和Hdm2及p53的体内相互作用在MCF-7细胞中,免疫共沉淀实验结果显示,UBE4B与p53存在着相互作用；同样,结果也显示UBE4B与Hdm2也存在相互作用。实验结果充分说明,在乳腺癌中,UBE4B与Hdm2和p53存在着体内相互作用。三、UBE4B负性调控p53并且促进p53的降解P53-/-的MCF-7细胞中,共同过表达p53、Flag-UBE4B以及Myc-Hdm2, p53的蛋白水平呈现下调状态；相反,敲低细胞中的UBE4B和Hdm2, p53的蛋白水平呈现上升趋势。在表达野生型p53的MCF-7细胞中梯度过表达UBE4B, p53呈现剂量依赖的下调的蛋白水平；我们分别将UBE4B-siRNA和con-siRNA转入MCF-7细胞用以证实在乳腺癌中,UBE4B对于Hdm2介导的p53降解是必要的。四、UBE4B抑制依赖于p53的细胞凋亡并且促进肿瘤的形成为了证实这个结论,我们进行了细胞凋亡实验,当过表达UBE4B时,p53的蛋白水平呈现下降趋势,且细胞凋亡的数量明显减少,说明UBE4B抑制细胞凋亡；在共转UBE4B-siRNA及Hdm2-siRNA的细胞中,细胞凋亡的数量明显多于共转UBE4B和Hdm2的细胞。为了进一步证实UBE4B对体内成瘤的效应,我们建立了裸鼠成瘤模型,分别给裸鼠皮下注射过表达UBE4B和空白载体的MCF-7细胞,结果显示注射过表达UBE4B细胞的一侧肿瘤生长速度明显大于注射过表达空白载体的一侧。研究结论：通过本研究,我们首次证实在乳腺癌中,UBE4B能够促进Hdm2介导的p53泛素化水平,对于p53的降解具有重要的生理作用。这些新的发现进一步证实：UBE4B作为一个癌基因,有可能参与促进乳腺癌的形成。因此,抑制UBE4B可能为乳腺癌的治疗带来新的有效方法。