背景与目的：肝癌是我国常见恶性肿瘤之一，其死亡率在消化系统肿瘤中列举第三位，我国每年约有11万人死于肝癌，占全球肝癌死亡数的45％，疗效差、复发率高是死亡率高居不下的主要原因。化疗是目前肝癌治疗和预防复发的主要方法之一，多药耐药现象是肝癌化疗的主要障碍，它是通过多种相关蛋白质的过度表达而导致肝癌细胞对多种抗肿瘤药产生抗药性。多药耐药相关蛋白是主要蛋白之一。本实验设想构建多药耐药基因(mrp1)真核表达载体pCI-neo-mrp1，将人多药耐药相关蛋白基因转入人肝癌细胞，以使其过度表达多药耐药性关蛋白，建立稳定的单因素人肝癌多药耐药细胞株HepG2／mrp1细胞。观察其生物学特性，再利用RNA干扰技术抑制多药耐药相关蛋白的表达，逆转其多药耐药性，探讨其耐药机理，为进一步研究肝癌多药耐药机制和逆转多药耐药的方法提供理论基础。 方法：利用限制性核酸内切酶双酶切含人全长mrp1 cDNA片段的克隆质粒pGEM-mrp1，得到人全长多药耐药相关蛋白基因，并将其定向克隆到哺乳动物真核表达载体pCI-neo的多克隆位点，构建成重组表达载体pCI-mrp1，再将其转入人肝癌细胞株HepG2中，建立转基因人肝癌多药耐药细胞株，经G418筛选，获得稳定表达MRP1的多药耐药细胞株