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目的:转化生长因子-β(transforming growth factor, TGF-β)是一种多功能的多肽类细胞因子超家族,几乎体内所有细胞都能分泌TGF-β并存在其受体,在细胞的生长调节中起重要作用。TGF-βl是最重要的致纤维化因子,而TGF-β3则有拮抗TGF-βl的作用。研究发现TGF-β3在肝脏中具有抗肝纤维化功能。为了促进机体内内源性TGF-β3的大量表达,本实验应用外源性重组细胞因子TGF-β3干预大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell, HSC),通过检测HSC中TGF-β3mRNA、蛋白的表达水平及HSC的增殖,探讨外源性TGF-β3对HSC分泌内源性TGF-β3及HSC增殖的影响。方法:体外培养HSC,加入外源性TGF-β3(10ng/ml)培养的细胞为TGF-β3组,未加入外源性TGF-β3培养的细胞为对照组,(1)分别在1h、2h、4h、12h和24h收集细胞,应用实时荧光定量PCR法检测内源性TGF-β3 mRNA表达;(2)分别在0h、1h、6h和12h收集细胞,应用western-blot法检测细胞内TGF-β3蛋白的表达;(3)分别在0h、2h、4h、8h、14h和24h收集细胞,应用ELISA法检测细胞外总TGF-β3蛋白的表达;加入外源性TGF-β3培养HSC 2h,然后换用无TGF-β3的DMEM培养基继续培养细胞至2.25h、2.5h、3h、4h、6h、10h和14h收集细胞上清液,应用ELISA法检测细胞外内源性TGF-β3蛋白的表达。(4)外源性TGF-β3对HSC增殖的影响:将HSC接种于96孔板,培养6h后,分为A、B两组,A组用不同浓度的外源性TGF-β3干预HSC,24h后用MTT法检测细胞增殖情况,B组用5ng/ml外源性TGF-β3干预HSC,在24h和48h时用MTT法检测细胞增殖情况;(5)细胞形态分析:倒置显微镜下观察对照组和外源性TGF-β3干预组的HSC大体形态。结果:(1)加入外源性TGF-β3干预HSC后,细胞内TGF-β3mRNA表达水平明显增高,于2h达峰值(3.756±0.667: 1.207±0.129),为对照组的3.11倍(P<0.05),随后缓慢降低,维持在1.56倍水平达10h之久,24h时(1.375±0.131: 1.066±0.085)表达水平仍为对照组的1.30倍(P<0.05);(2)不同时间点细胞内TGF-β3表达水平无显著变化(P>0.05);(3)细胞外总TGF-β3含量明显增加,于4h时达高峰(18.931±2.904:10.026±0.022ng/ml),约为干预量的1.89倍,随后开始下降;内源性TGF-β3于干预后3h达高峰(0.835±0.027:0.026±0.022ng/ml),为对照组的32.36倍,之后开始逐渐降低,直至维持一个弱增长的表达状态(P<0.05)。(4)低浓度的外源性TGF-β3(0.001-0.08ng/ml)不影响HSC的增殖,从0.32ng/ml开始,外源性TGF-β3可促进HSC的增殖,HSC的增殖与外源性TGF-β3无剂量依赖关系(P>0.05);(5)镜下观察HSC,TGF-β3干预组细胞形态与空白对照组相比无明显差异。结论:(1)外源性TGF-β3可促进HSC分泌大量内源性TGF-β3;(2)TGF-β3可促进HSC的增殖;(3)外源性TGF-β3的干预对HSC细胞大体形态无明显影响。