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目的观察骨癌痛大鼠背根神经节（Dorsal Root Ganglion, DRG）部位Nav1.7表达变化和脊髓胶质细胞的活化情况。方法30只雌性SD大鼠，体重180～220g，随机分为3组：正常组（N组，n=6），假手术组（Sham组，n=6）和模型组（Ca组，n=18）。正常组不做处理，假手术组和模型组大鼠分别于左胫骨近端骨髓腔注射生理盐水或Walker256乳腺癌细胞(1×107/ml)10μl。三组均在建模前、建模后第3、6、9、12d测定大鼠左后肢机械缩足阈值（Mechanical Withdrawal Threshold，MWT），正常组和假手术组大鼠于建模后第18d处死，模型组于建模后第8、12、18d各处死6只大鼠，取DRG和L4～6脊髓组织，用RT-PCR和Western-Blot方法检测大鼠DRG部位Nav1.7和脊髓GFAP（星形胶质细胞激活标志）、OX42（小胶质细胞激活标志）的表达变化情况。结果建模后6～12d，模型组大鼠左后肢机械缩足反射阈值显著下降，且呈时间依赖性进展；建模后第8d，DRG部位Nav1.7的转录和蛋白水平显著增高（P<0.05），12d、18d继续增高（P<0.05）；建模后第8d、12d，脊髓OX42的转录和表达也显著增高（P<0.05）；建模后12d、18d时GFAP的转录和表达显著增高（P<0.05）。结论骨癌痛大鼠DRG部位Nav1.7表达增高，相应节段的脊髓胶质细胞激活。目的设计合成针对大鼠Nav1.7基因的若干对shRNA，分别构建慢病毒载体，体外转染靶细胞，筛选出沉默效率最高的shRNA慢病毒载体。方法根据RNA干扰原理及shRNA设计原则，设计四对shRNA，分别与pGLV-U6-GFP连接，构建针对大鼠Nav1.7基因的慢病毒载体（LV-4495、LV-390、LV-830、LV-3291），体外转染经NGF诱导的PC12细胞。荧光显微镜下观察转染效率，96h后分别收集细胞行RT-PCR和Western-Blot检测Nav1.7基因及蛋白的变化。结果所构建的载体均可有效转染PC12细胞，转染率达到85%。其中慢病毒载体LV-3291在96h时可以显著抑制Nav1.7基因的mRNA水平及蛋白表达（P<0.05）。结论慢病毒载体LV-3291可以有效转染PC12细胞，在96h时可以显著抑制Nav1.7的表达。目的在骨癌痛早期予以鞘内注射Nav1.7的shRNA慢病毒载体，观察其对骨癌痛大鼠的影响。方法54只雌性SD大鼠，体重180～220g，随机分为3组：癌痛+PBS组（Vehicle组，n=18），癌痛+空病毒组（LV-GFP组，n=18），癌痛+Nav1.7shRNA慢病毒载体组（LV-Nav1.7组，n=18）。建模后第4d，Vehicle组鞘内注射10μl PBS，LV-GFP组和LV-Nav1.7组分别鞘内注射空病毒和LV-3291慢病毒液10μl。建模后第3、6、9、12、18d测定大鼠左后肢机械缩足阈值MWT，于建模后第8、12、18d各处死6只大鼠，取DRG和L4～6脊髓组织，用RT-PCR和Western-Blot方法检测大鼠DRG部位Nav1.7和脊髓GFAP、OX42的表达变化情况。结果建模后4d鞘内注射慢病毒载体LV-3291可以有效抑制大鼠的骨癌痛，在造模后18d时仍有抗伤害作用。免疫荧光染色可见神经元表达GFP。LV-GFP组各时间点的Nav1.7、GFAP、OX42与Vehicle组相比无显著差异。与LV-GFP组相比，LV-Nav1.7组建模后12d、18d时的Nav1.7、GFAP、OX42转录和表达均显著降低（P<0.05）。结论鞘内注射慢病毒载体LV-3291可有效转染大鼠DRG神经元。于骨癌痛早期应用可以长期、有效降低大鼠DRG Nav1.7的转录和表达，抑制脊髓星形胶质和小胶质细胞的活化，并显著减轻大鼠骨癌痛。目的制作吗啡耐受的骨癌痛大鼠模型，并观察鞘内注射Nav1.7shRNA慢病毒载体对其影响。方法18只雌性SD大鼠，骨癌痛模型造模后6d，鞘内注射吗啡10μg/次，每日两次，连续注射7天，采用热甩尾潜伏期法测定痛阈，判断有无吗啡耐受。随后将吗啡耐受大鼠随机分为三组：癌痛吗啡耐受+PBS组（Vehicle组，n=6），癌痛吗啡耐受+空病毒组（LV-GFP组，n=6），癌痛吗啡耐受+Nav1.7shRNA慢病毒载体组（LV-Nav1.7组，n=6）。分别于建模后第13d，Vehicle组鞘内注射10μl PBS，LV-GFP组和LV-Nav1.7组分别鞘内注射空病毒和LV-3291病毒液10μl。三组均在建模前、建模后第6d、12d、18d、24d测定大鼠左后肢机械缩足阈值，于建模后第24d处死，取DRG和L4～6脊髓组织，用RT-PCR和Western-Blot方法检测大鼠DRG部位Nav1.7和脊髓GFAP、OX42的表达变化情况。结果大鼠在第一天鞘内注射吗啡后，痛阈明显升高（P<0.05）；连续注射吗啡后，大鼠用药后的痛阈逐渐下降，第7天用药后痛阈降至基础水平。鞘内注射Nav1.7shRNA慢病毒载体后，LV-GFP组和Vehicle组相比，MWT无显著差异；LV-Nav1.7组与其相比，建模后18d、24d的MWT显著增高（P<0.05）。LV-GFP组的Nav1.7、GFAP、OX42与Vehicle组相比无显著差异。与LV-GFP组相比，LV-Nav1.7组的Nav1.7、GFAP显著降低，OX42无显著变化（P<0.05）。结论骨癌痛大鼠连续鞘内注射吗啡，可成功诱导吗啡耐受。对骨癌痛吗啡耐受大鼠，鞘内注射慢病毒载体LV-3291仍可降低大鼠DRG Nav1.7的转录和表达，减轻脊髓星形胶质的活化，产生抗伤害作用。