副溶血弧菌噬菌体qdvp001的分离鉴定及其在牡蛎净化中的初步应用

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副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)为革兰氏阴性菌,广泛存在于近海岸的海水、海底沉积物及鱼类、贝类等海产品之中。该致病菌主要感染对象有对虾、海水鱼类、文蛤和牡蛎等,此类病菌给企业的渔业生产带来巨大的经济损失,对海水鱼类规模化养殖和发展造成了巨大的威胁。而弧菌致病菌不仅对水产动物造成威胁,同时也是引起人类食物中毒的主要因素,特别是沿海省份,近年来由副溶血性弧菌引起的食物中毒高居微生物性食物中毒首位,在其发生规模及人群暴露规模上呈明显上升趋势。人类食用大量污染了副溶血弧菌而又未经良好加工处理的水产品后会引起食物中毒,其症状主要表现为急性起病、呕吐、腹痛、腹泻及水样便,直接影响着人类的健康。为了探索行之有效的控制水产品养殖环境中的副溶血弧菌的方法,本研究以副溶血弧菌Vp17802为宿主菌,从水产市场的污水中分离纯化出一株强裂解性噬菌体qdvp001,并研究了其生理生化特性及其在生物防治中的应用,为噬菌体应用于贝类净化奠定了基础。研究结果如下:1以副溶血弧菌Vp17802为宿主菌,采用双层琼脂平板法从污水样品中分离得到一株噬菌体,命名为qdvp001,经液体或固体增殖法增殖后该噬菌体的效价较高,能达109pfu/ml以上。噬菌斑呈圆形,中心清亮,边缘隐约有晕环,噬菌体效价高,体外裂解能力强,是一株具有特异性强裂解性的噬菌体,可以为后续工作提供良好的试验材料。2对噬菌体qdvp001的生理生化特性进行测定,结果表明:该噬菌体对热的稳定性较高,对60℃以下的温度耐受力较强,而对70℃及其以上的高温非常敏感,在此温度下噬菌体基本上被灭活;对pH值的适应范围较宽,在pH值4~12内能保持较高的裂解活性,最佳pH值在8左右;最佳感染复数为0.0001,感染宿主菌的潜伏期约为20min,裂解期约为70min。3电镜观察显示,该噬菌体头部呈正二十面体,直径大约为79nm,尾长大约118nm,属于肌尾噬菌体科,基因组为线型双链DNA;SDS-PAGE电泳后显示出一条主要区带和四条次要区带,即至少含有五种结构蛋白,其中主区带结构蛋白的相对分子质量约为35KD;通过基因组测序和NCBI的同源性分析结果显示,qdvp001与其他噬菌体的同源性较低,所以是一种新发现的噬菌体。4将该噬菌体应用于牡蛎的初步净化试验,发现其对牡蛎养殖环境中和牡蛎体内的副溶血弧菌均具有净化作用。作用72h后,可以将养殖环境中含量为1.0×10~8cfu/ml和1.0×10~6cfu/ml的副溶血弧菌的浓度分别下降5个数量级和3个数量级,而添加噬菌体后牡蛎体内副溶血弧菌的数量也明显下降。总之,本试验分离得到的噬菌体qdvp001是一种新发现的噬菌体,它的裂解能力较强,对理化因素的耐受力较强,并且对牡蛎养殖环境及体内的副溶血弧菌具有明显的清除作用,为噬菌体应用于贝类净化的可行性提供了理论支持。
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