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第一部分:AKT2通过促进CD19磷酸化调控B细胞激活和功能背景及目的:AKT2是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在肌肉组织和脂肪细胞中高表达,同时在免疫细胞中表达,是调节细胞新陈代谢、增殖、存活和血管生成等的重要激酶。目前AKT2在糖尿病发生发展中的研究很多,在免疫系统中,有研究报道AKT2参与调控T细胞、中性粒细胞及巨噬细胞的功能。但是目前尚无AKT2参与调控B细胞功能研究的报道,本研究拟运用AKT2全敲小鼠模型研究AKT2在BCR信号转导和B细胞分化中的作用。方法:在本研究中,我们运用了AKT2敲除的小鼠模型。通过流式细胞术来检测AKT2对B细胞发育、分化的调控,并且用骨髓嵌合小鼠模型来排除外源性因素对B细胞发育及分化的影响。建立体内NP-KLH免疫模型检测AKT2对B细胞介导的体液免疫应答的调控。为探讨AKT2对B细胞活化的调控机制,通过共聚焦显微镜及磷酸化流式技术检测AKT2对BCR信号转导的作用。通过全反射荧光显微镜技术检测AKT2对B细胞早期活化的影响及机制。结果:（1）与WT小鼠比较,AKT2敲除小鼠骨髓B细胞发育无明显异常,但脾脏GC B细胞亚群减少。在骨髓嵌合小鼠中,AKT2 KO小鼠的GC B细胞较WT组也是下降的,说明AKT2对GC B细胞的影响是细胞固有的。（2）AKT2敲除小鼠B细胞在接受NP-KLH免疫后分泌的IgM及IgG1较WT组下降,提示AKT2敲除小鼠B细胞介导的体液免疫功能受损。（3）通过在体外用可溶性抗原刺激B细胞,用激光共聚焦显微镜对BCR与磷酸化酪氨酸蛋白（pY）的共定位关系检测发现,AKT2敲除小鼠的BCR和pY的共定位系数在5,10min较WT明显减低。并且用流式细胞学检测发现AKT2敲除小鼠pY的平均荧光强度较WT组减弱,说明AKT2敲除小鼠早期激活BCR信号形成受损。（4）与WT组比较,AKT2敲除后小鼠脾脏B细胞早期激活过程中B细胞的扩张、BCR簇的形成和BCR信号小体的形成均受损。（5）AKT2缺失导致了小鼠脾脏B细胞在抗原刺激后BCR活化过程中肌动蛋白聚合减低,且参与调控肌动蛋白聚合的WASP的磷酸化水平下降,但编码WASP基因的mRNA在WT及AKT2 KO小鼠中表达无明显差异。（6）AKT2缺失导致小鼠脾脏B细胞早期活化过程中磷酸化CD19水平下降,但是编码CD19基因的mRNA水平无明显差异,而且WT及AKT2敲除小鼠中MZ和FO两群细胞CD19表达亦无明显变化。结论:AKT2可以促进小鼠GC B细胞的分化,而且参与调控B细胞介导的体液免疫应答。AKT2通过调节CD19磷酸化,促进BCR信号转导和肌动蛋白重构,参与对B细胞早期激活的调节,对B细胞的功能具有重要作用。第二部分:PGRN通过EZH2调控NKT2细胞发育及功能的机制研究背景及目的:支气管哮喘是儿童时期最常见的慢性呼吸系统疾病,是由多种细胞共同参与的慢性气道炎症。恒定自然杀伤（invariant natural killer T,i NKT）细胞是表达T细胞和NK细胞表面标志的特殊T细胞亚群,越来越多的研究表明i NKT细胞在支气管哮喘中发挥重要作用。颗粒蛋白前体（Progranulin,PGRN）是一种重要的分泌型蛋白,广泛表达于包括免疫细胞内的多种细胞中,主要功能之一是拮抗TNF-α信号通路从而发挥生物学作用。有研究表明,在支气管哮喘的患者的血清中PGRN表达较正常健康对照减低,而且PGRN表达越低,气道中中性粒细胞的浸润越严重。有研究表明,巨噬细胞来源的PGRN可以诱导NKT细胞产生Th2类细胞因子促进气道炎症反应,但是具体调控机制尚不清楚。本研究用PGRN敲除小鼠研究PGRN对i NKT细胞的发育及功能调控作用及具体调控机制进行探讨。方法:在本研究中,我们首先通过流式细胞术检测WT及PGRN KO小鼠胸腺中i NKT细胞及其亚群的变化了解PGRN对i NKT细胞发育及分化的影响。其次,我们运用骨髓嵌合小鼠排除外源性因素对i NKT细胞发育及分化的干扰。再次,通过对i NKT细胞特异的刺激了解其分泌细胞因子的变化,进一步检测Ig E的表达及气道阻力了解PGRN对i NKT细胞功能的调控。此外,我们通过RT-PCR、WB、共聚焦等实验探讨PGRN调控i NKT细胞发育及功能的具体机制。结果:（1）PGRN敲除小鼠胸腺的i NKT细胞百分比较WT组升高,但是其细胞计数较WT组下降,并且在PGRN敲除小鼠中,Stage0和Stage1亚群i NKT细胞较WT组下降,说明PGRN参与对i NKT细胞的发育调控。（2）对i NKT细胞亚群检测发现,PGRN敲除小鼠胸腺中NKT2细胞亚群的百分比及细胞计数较WT组明显减低,提示PGRN可以促进NKT2细胞亚群的分化。（3）PGRN敲除小鼠胸腺i NKT细胞在刺激后分泌的IL-4较WT组减低,说明PGRN促进小鼠胸腺i NKT细胞分泌IL-4。（4）PGNR敲除小鼠中Ig E+B细胞及血清中Ig E抗体滴度较WT组减少,PGRN可以促进小鼠Ig E的产生。（5）在接受不同浓度的乙酰胆碱刺激后,PGRN敲除小鼠的气道阻力较WT组降低,PGRN可以促进小鼠产生气道高反应性。（6）与WT组小鼠相比较,PGRN敲除小鼠NKT2细胞的凋亡明显增加,提示PGRN可以抑制NKT2细胞凋亡。（7）PGRN敲除小鼠中PLZF蛋白表达较WT组下降,而且在用α-Galcer刺激后,PLZF的核内聚较WT组减弱。说明PGRN可以促进PLZF的表达及核内聚,参与调控NKT2细胞的分化及功能。（8）与WT组比较,PGRN敲除小鼠胸腺i NKT细胞表达Ezh2升高,而且通过使用Ezh2抑制剂在小鼠体内处理小鼠后,PGRN敲除小鼠胸腺i NKT细胞、NKT2细胞及PLZF的表达较处理前均升高。说明PGRN通过抑制Ezh2来调控PLZF的表达及NKT2细胞的发育。结论:PGRN通过抑制Ezh2,促进PLZF的表达,参与调控NKT2细胞的发育及功能。本研究阐明了PGRN参与调控小鼠NKT2细胞分化发育、功能及具体机制,揭露了PGRN在支气管哮喘中的发病作用,为临床支气管哮喘的治疗提供了新的理论依据。