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目的探究光甘草定(glabridin)对人结直肠癌细胞RKO和HCT116细胞的迁移和凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法不同浓度的光甘草定、MLCK抑制剂ML-7、ROCK抑制剂H-1152以及p38通路抑制剂SB203580、JNK抑制剂SP600125和PKC激活剂PMA处理RKO和(或)HCT116细胞;采用MTT比色法检测光甘草定对RKO和HCT116细胞活力的影响,平板克隆实验检测光甘草定对结直肠癌细胞克隆形成能力的影响,通过Hoechst 33258染色检测光甘草定对RKO细胞凋亡的影响;通过细胞划痕和Transwell实验观察光甘草定对RKO和HCT116细胞迁移和侵袭能力的影响;免疫荧光检测光甘草定处理结直肠癌细胞后E-cadherin、N-cadherin以及HCT116细胞内紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的变化。Western blot检测RKO细胞中凋亡相关蛋白(BCL-2、Bax、Caspase家族),HCT116细胞中紧密连接蛋白ZO-1、occludin,RKO和HCT116细胞中E-cadherin、N-cadherin以及迁移相关蛋白(Rho A、ROCK、MLCK、MLCP、p-MLC)以及MAPK信号转导通路相关蛋白的表达情况,并加入抑制剂和激活剂分析其可能的机制。结果光甘草定作用于RKO和HCT116细胞后,对细胞的增殖、克隆形成能力和迁移、侵袭有明显抑制作用。光甘草定诱导RKO细胞凋亡,并下调抗凋亡蛋白Bcl-2、Procaspase 9表达水平和上调Bax、Caspase 3蛋白表达,而对Caspase 8蛋白表达影响不明显。光甘草定处理后,RKO和HCT116细胞迁移相关蛋白MYPT1磷酸化水平及MLC磷酸化水平下调,RKO细胞内Rho A、ROCK1、ROCK2表达水平均明显下调,而HCT116细胞内Rho A、ROCK1、ROCK2蛋白无明显变化;为进一步的验证,我们采用MLCK的特异性抑制剂ML-7或ROCK的特异性抑制剂H-1152处理RKO和(或)HCT116细胞,观察到二者对RKO和(或)HCT116细胞的迁移存在抑制作用且能下调MLCK、ROCK1或p-MYPT1蛋白的表达,提示光甘草定可能通过抑制MLCK和ROCK活性而抑制RKO和(或)HCT116细胞的迁移能力。光甘草定在不同时间点处理结直肠癌细胞后,两株细胞中ERK无明显变化,RKO细胞内JNK磷酸化水平先上升后下降,p38通路上调,而HCT116细胞中JNK通路下调后恢复,p38通路上调。加入JNK和p38/MAPK通路抑制剂后能下调迁移相关蛋白MYPT1和MLC的磷酸化水平,表明光甘草定可能部分通过JNK信号通路,下调MLC磷酸化水平,从而导致细胞运动能力降低而抑制迁移。光甘草定能抑制RKO和HCT116细胞上皮间质转化过程,上调上皮细胞标志物E-cadherin,下调间叶细胞标志物N-cadherin;并且上调HCT116细胞膜上紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的蛋白水平。结论光甘草定抑制结直肠癌RKO和HCT116细胞的增殖与迁移,并诱导RKO细胞凋亡;其抑制迁移的机制可能是通过JNK信号通路下调MLC磷酸化水平,增加E-cadherin表达,降低N-cadherin表达,逆转上皮间质转化,并上调紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达抑制结直肠癌细胞的迁移。