近代肿瘤研究已进入从分子水平阐明其发病机制和探求方便、有效的早期诊断及分子生物学治疗的阶段。胃肠肿瘤是最常见的肿瘤之一，在我国，它依然高居诸恶性肿瘤之首，早期诊断及治疗困难，具有极大的危害性。本课题利用免疫组织化学方法、原位杂交技术、蛋白分离技术对Hsp70与胃癌、大肠癌的内在联系进行研究，旨在探求Hsp70在胃癌、大肠癌生物学行为中的作用，寻求有效的诊断及治疗的靶物质。 一、Hsp70在胃癌、大肠癌中的表达及作用 胃癌组：诊断明确、资料完整的胃癌根治手术后的临床标本63例，其中有淋巴结转移者28例，无淋巴结转移者35例；正常胃粘膜18例；慢性浅表性胃炎24例；慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生20例；不典型增生15例。结果显示：Hsp70在胃癌组织中的阳性表达率为58.8％，阳性颗粒位于胞浆内。正常胃粘膜、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生、不典型增生的阳性表达率分别为11.1％、20.8％、40％、46.7％。统计分析有显著差异性（P＜0.01）。Hsp70在正常胃粘膜，慢性浅表性胃炎，慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生，不典型增生及胃癌组织的表达率呈递增形式。P53蛋白在胃癌中阳性率为52.4％。在同一胃癌标本中，往往可见 第二军医大学 学位论文 Hsp70与P53蛋白共同表达，阳性率为50．8％，二者比较，r 一0．sl，表达具有相关性；HSp70在 28例有淋巴结转移组中有 22例 阳性，无淋巴结转移组中有 15例阳性；P53蛋白在有淋巳结转移组 中有 ZI例阳性，无淋巴结转移组中有 12例阳性。HSp70和 P53蛋 白在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中的表达经统计分析有显著 差异性（P＜0刀1）。 大肠癌组：大肠癌根治术后的临床病理标本中选择诊断明确， 资料完整的病例67例。根据癌细胞分化程度划分：高分化腺癌9 例，中分化腺癌36例，低分化腺癌22例；有淋巴结转移39例， 无转移28例；Dukes’分期：A期3例，B期31例，C期26例，D期 7例；正常大肠粘膜标本20例。结果显示：正常大肠粘膜上皮细胞 中，Hsp70 mRNA阳性表达 3例＊5知，呈少量分布，P53蛋白阴性表 达．67例大肠癌中，Hsp70 mRNA＊性者 36例（53．70），大量分布，＊ 性颗粒位于细胞核内．P53蛋白阳性者38例历6．0知，阳性颗粒定位 于细胞核内．两者在正常、癌旁以及浸润癌的表达呈递增形式．在同 一标本中两者共同阳性表达者为 ZS 例（51．％），X‘＝9．07，r＝0 37， H者具有相关性。Hsp70 mRNA在高、中、低分化大肠癌组织中的表 达中分别3（33．3％）、16（44．4％）、17 O7．3％），结果表明，三者具有显 著差异性．Hsp70 mRNA的表达与淋巴结转移有关（peo．01），与性 别无关（尸＞o．05），在Dukes’分期中，A期、B期、C期、D期无 显著差异性（尸＞0．05）。 本实验利用组织免疫化学方法、原位杂交技术证明了HSp70及 其基因参与了肿瘤的发生发展过程，HSp70可作为胃癌、大肠癌的 早期诊断、预后的有效指标，其基因可作为胃癌、大肠癌基因治疗 的靶基因。 二、目癌H8p70的初步提纯 2 第二军医大学 学位论文 用肿瘤细胞或其提取物对癌症患者进行主动特异性免疫治疗 归ctive sPecific immunotheraPy，ASI）的设想与尝试始于本世纪初 （1902，Leyden和 Blumenthal）。但是在随后的半个世纪内，无论是 采用患者自体的、还是其他患者同种（异体）瘤细胞或建立的瘤细 胞系所制备的肿瘤细胞疫苗均未获得肯定的疗效。近年来随着免疫＿学、肿瘤免疫学理论和生物工程技术的发展，使得肿瘤免疫治疗展 现良好的前景。 本实验采用亲和层析法初步分离胃癌中的HSp70，并用蛋白电 泳技术证实其分子量。结果显示：利用亲和层析法可以初步分离出 胃癌中的HSp70，电泳带位于70kD附近，较均一。 本实验在国内首次从胃癌中初步分离出HSp70，为今后利用 HSP70－肽复合物主动特异性免疫治疗胃癌提供试验基础。