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类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种慢性自身免疫性疾病，以滑膜细胞炎症和细胞过度增殖、血管增生为特征，最终可导致骨和软骨的破坏。虽然RA的病因至今未明，但大量研究表明，细胞因子在其发病机制中占重要地位。抗原激活的CD4+T细胞可刺激单核细胞、巨噬细胞产生细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6以及间质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP）。而成纤维细胞样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes, FLS）又可在单核-巨噬细胞产物和血小板源性生长因子（platelet-derived growth factor, PDGF）的作用下发生反应，并表现出炎症细胞的特征，如FLS分泌的MMP（主要是MMP-2和MMP-9）可导致骨和软骨的降解；它也可通过分泌IL-6、表达细胞间粘附分子-1（intercellular adhesion molecular, ICAM-1）和血管细胞粘附分子-1（vascular cell adhesion molecular, VCAM-1）参与其他免疫细胞在炎症关节局部的聚集和活化。由此可见，FLS是关节炎症和破坏的主要效应细胞。因此，调控FLS，尤其是其细胞因子的分泌对RA的发生和发展具有重要的意义。有报道证实，体内一些神经肽/激素如生长激素、生长抑素、血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide, VIP）、垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide, PACAP)、降钙素基因相关肽、八肽胆囊收缩素（cholecystokinin octapeptide, CCK-8）、神经加压素等均具有一定的抗炎作用，是神经-内分泌-免疫调节的重要物质。CCK及其受体在体内分布广泛，以激素或神经递质/调质的形式发挥重要的生理功能。多年来，本室对CCK-8的抗内毒素休克（endotoxic shock, ES）和抗炎作用进行了系列研究。CCK-8可使ES大鼠死亡率下降，明显减低肺脏、脾脏、肾脏间质水肿及炎性细胞浸润等炎症性病理变化，缓解ES大鼠早期肺动脉高压，明显抑制ES大鼠肺脏和脾脏所产生的TNF-α、IL-1β和IL-6；而在离体实验中，<WP=5>CCK可抑制LPS诱导的肺间质巨噬细胞（pulmonary interstitial macrophages, PIMs）对TNF-α的生成、转录及NF-κB的活性，下调LPS受体CD14的表达。最近，脑肠肽VIP和PACAP在RA动物模型胶原性关节炎（collagen-induced arthritis, CIA）小鼠中的疗效引人注目。VIP和PACAP显著降低了CIA小鼠的发病率，减轻了发病动物的疾病严重程度，调节了CIA中Th1/Th2细胞之间的失衡，下调炎症因子反应，抑制了MMP的表达；而在体外实验中，VIP可显著降低RA滑膜细胞对IL-6、IL-8的分泌。这些实验提示了VIP和PACAP用于RA治疗的广泛前景。最近研究表明，在免疫性关节炎的模型中，CCK-8虽然本身没有直接的抗炎作用，但可通过调控神经生长因子（nerve growth factor, NGF）的分泌对角叉菜胶诱导的大鼠关节炎症起到了调节作用。然而，CCK-8对滑膜细胞细胞因子的调控作用及其机制的研究，目前尚未见报道。在RA慢性炎症的迁延中，细胞因子的生成增加、粘附分子的表达以及破坏性酶的合成起重要作用。其中多个环节由转录因子家族调控。NF-κB被认为是促炎性基因表达的最主要转录调节物。在RA的发病过程中，TNF-α和IL-1β等细胞因子的合成和环加氧酶2的表达均由NF-κB介导。NF-κB的活化促进了粘附分子E选择素、ICAM-1、VCAM-1的表达，抑制NF-κB则可减少白细胞的粘附和游走。而在整体实验中，NF-κB在CIA小鼠中的活化作用增加了MMP的表达和关节炎症的严重程度。抑制NF-κB活化还可对滑膜细胞的增殖起促进作用。所有这些现象表明，NF-κB参与了RA的整个病理过程。在静息状态下，NF-κB在胞浆中与其抑制蛋白IκB结合而处于无活性状态。在外来信号介导下，IκB发生磷酸化、泛素化和蛋白降解，使NF-κB移位入核，与参与免疫炎症反应物质的靶基因调节序列结合并调控其基因转录。CCK通过其受体发挥广泛的生理功能。CCK受体可分为两类：CCK-A受体（CCK receptor A, CCK-AR）和CCK-B受体（CCK receptor B, CCK-BR）/胃泌素受体。CCK-AR主要分布于外周组织，介导胆囊和胃的收缩、胰腺的生长和胰酶的分泌；而CCK-BR/胃泌素受体主要存在于中枢神经系统和胃肠道的局部，参与了焦虑、精神病和镇<WP=6>痛的调节。本室近年来对CCK受体的研究发现，在大鼠肺组织、心肌组织中均在CCK-AR和CCK-BR mRNA的表达，而且在LPS的诱导下，两种受体mRNA表达均上调，是CCK-8改善ES大鼠肺组织形态学改变和心功能下降的重要分子机制之一。本实验以正常来源的大鼠FLS细胞株RSC-364为对对象，系统研究CCK-8对TNF-α作用下TNF-α－IκB－NF-κB－cytokines这条信号通路的影响，并用RT-PCR技术检测RSC-364细胞CCK-AR/CCK-BR的存在以及在外来刺激下的表达改变，以揭示CCK-8在RA炎症中的潜在调控作用。1 .CCK-8对大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌细胞因子及基因表达的影响应用大鼠FLS细胞株RSC-364，在加入或不加入CCK-8和/或丙谷胺的情况下，用TNF-α刺激细胞一定时间，用ELISA法检测培养上清中IL-6、TNF-α、IL-1β的含量，用RT-PCR技术分析细胞中IL-6 mRNA的表达。数据用均数±标准差（±s）表示，用SPSS统计分析软件进行统计学分析。各组均数的比较行单因?