恶性肿瘤严重威胁着人类的生命健康,它的治疗是医学上亟待解决的难题。目前,化学治疗在恶性肿瘤的治疗中起着不可或缺的角色。然而,由于肿瘤多药耐药性的出现以及肿瘤干细胞的存在,单一化疗药物无法起到很好的治疗效果,加之新药研发成本过高、进度迟缓,因而无法满足临床需求。抗肿瘤药物的联合使用作为一种高效低毒的治疗策略越来越受到人们的关注与重视,尤其是靶向药物和细胞毒类药物的联用为肿瘤的彻底治愈提供了可能。5-FU是一种常用的化疗药物,然而,由于其存在骨髓抑制,胃肠道反应等严重的不良反应,使其在临床上的应用逐渐受到限制。联合用药的出现为5-FU在临床上的应用找到了一条新的出路,其中,氨肽酶N抑制剂与5-FU的联合应用受到了科学家们的重视。氨肽酶N(Aminopeptidase N, APN)隶属于金属蛋白酶M1家族中的Gluzincins亚族中的一员,它能够降解细胞外基质与肿瘤的侵袭转移有着重要的联系,一直是抗肿瘤药物研究的热门靶点。因此,本课题选择氨肽酶N抑制剂与5-FU联合应用进行研究。通过以下几方面进行研究并得到了相关结论：(1)体外活性评价：首先通过体外酶活实验初步确实了二者联用不会产生相互作用,5-FU不影响氨肽酶N抑制剂与其结合位点的结合；再通过流式细胞仪检测各种肿瘤细胞表面氨肽酶N的表达量,发现人卵巢癌细胞(ES-2)与人小细胞肺癌(A549)为高表达,选择ES-2进行细胞酶活实验,细胞酶活实验进一步证实了5-FU不会与氨肽酶N以及氨肽酶N抑制剂中的其中任何一个发生相互作用,这一结论为二者能够联合提供了合理性证明。然后进行了八株肿瘤细胞的抑制增殖实验,结果显示,联合用药组的抑制能力明显优于单独5-FU以及Bestatin组,其中在大部分肿瘤细胞中5-FU:Bestatin 5:1 与 5-FU:Bestatin 10:1作用较为突出；正常细胞毒实验结果证明联合用药的毒性5-FU:Bestatin 5:1是单独5-FU组的1/6,5-FU:Bestatin 10:1是其1/2,因此最终选择5：1进行后续实验。体外实验初步证明联合用药具有减毒增效的作用。(2)体内活性评价：H22荷瘤小鼠实验中,5-FU联合Bestatin的低剂量组抑瘤率接近于单独5-FU给药组,分别为50.4%与49.2%,高剂量联合用药组抑瘤率达到了62%, Bestatin单独给药组抑瘤率仅仅为30.6%,而且5-FU单独给药组出现了动物死亡,体重下降的现象,这在联合用药组及Bestatin单独给组中没有出现。可见5-FU联合Bestatin确实具有减毒增效的作用。(3)机制的初步研究：通过流式细胞仪对各实验组进行凋亡与周期检测,在人卵巢癌细胞(ES-2)与人肝癌细胞(PLC/PRF/5)的凋亡率分别为：Bestatin为25.01%,5-FU为28.48%,而5-FU:Bestatin 5:1为41.58%; Bestatin为6.57%,5-FU为8.85%,而5-FU:Bestatin 5:1为20.86%,联合用药大大的增加了对细胞凋亡的诱导作用,这可能是两药联合应用具有更好的体内体外抑制肿瘤细胞增殖的原因之一。PLC/PRF/5细胞的周期检测结果显示,联合用药使大部分肿瘤细胞阻滞S期,相对于5-FU来说,它对于Go/G1期细胞也有一定的阻滞作用。(4)氨肽酶N抑制齐4Q, M03与5-FU联合：此部分主要对本实验室设计的氨肽酶N抑制剂与5-FU的联合进行了体外活性的评价。首先通过体外酶活实验与ES-2细胞表面酶活实验确定了4Q,M03与5-FU联用不会产生相互作用,5-FU不影响氨肽酶N抑制剂与其结合。MTT实验证明氨肽酶N抑制剂4Q,M03与5-FU联合对多种肿瘤细胞的增殖具有抑制作用。体外活性实验证明氨肽酶N抑制剂4Q,M03与5-FU联合有较强的抗肿瘤活性。(5)5-FU衍生物与Bestatin联合：为了使联合给药方便,设计用与Bestatin给药方式相同的口服给药有效的5-FU衍生物希罗达与替加氟联用。MTT实验证明联合用药可以抑制多种肿瘤细胞的体外增殖活性,且大多以1：1的比例为最佳。以此比例进行动物实验,结果希罗达高剂量组与替加氟高剂量组抑瘤率均高于希罗达,替加氟单独给药组动物并没有出现体重下降的现象。体内体外活性结果说明5-FU衍生物与Bestatin联合具有很好的抗肿瘤活性。总体来说,氨肽酶N抑制剂与5-FU及其衍生物联合抗肿瘤具有相对更好的疗效,毒副作用低,耐受性好,具有很好的临床开发价值。