红汁乳菇发酵液抑菌活性初步研究

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红汁乳菇(Lactarius hatsudake Tanaka),隶属于真菌门(Eumycota),担子菌亚门(Basidiomycotina),层菌纲(Hymenomycetes),伞菌目(Agaicales),红菇科(Russulaceae),乳菇属(Lactarius)。红汁乳菇是油松、马尾松等树种的菌根菌,也是一种珍贵的野生食用菌,不仅营养丰富,且对多种细菌及霉菌有抑菌活性,是研究天然抑菌活性物质的重要资源。本文以大肠杆菌为指示菌,以发酵液对大肠杆菌的抑菌圈直径为指标,采用二次通用旋转组合设计方法,对红汁乳菇发酵基质及发酵环境条件进行了优化,并在此基础上对抑菌活性及成分进行了初步研究,以期对红汁乳菇抑菌物质的开发利用提供一定参考。主要研究结果如下:1.筛选出优势菌株SH-3。2.通过建立数学模型,得到红汁乳菇优化基质配方为:葡萄糖48.30g/L,麦芽糖45.29g/L,蛋白胨4.69g/L,酵母膏4.12g/L,KH2PO41.0g/L,MgSO40.5g/L,抑菌圈理论直径为20.1mm;红汁乳菇发酵环境条件优化结果为:发酵4d,摇床转速为145r/min,初始pH为7,摇瓶装液量为108mL/瓶,温度为25℃,抑菌圈理论直径为27.8mm。3.红汁乳菇发酵液具有很好的热稳定性;红汁乳菇发酵液在pH为5.0~7.0时抑菌活性稳定;红汁乳菇发酵液对紫外线照射不敏感;红汁乳菇发酵液可在25℃下放置130d其抑菌活性基本不变;低浓度的H2O2与Na2SO3对发酵液的抑菌活性影响较小,高浓度的H2O2与Na2SO3对发酵液的抑菌活性影响较大。4.红汁乳菇发酵液对蜡状芽孢杆菌(F2)、枯草芽孢杆菌(E3)和沙门氏杆菌S1的抑制作用最强,对大肠杆菌(E)、巴氏杆菌、地衣芽孢杆菌(F1)和沙门氏杆菌S2的抑制作用较强,对黄曲霉、根霉、沙门氏杆菌(S8)、石羊猪葡萄球菌的抑制作用较弱,对米曲霉、毛霉、绿色木霉和青霉基本没有抑制作用。5.对红汁乳菇发酵液极性试验可知,红汁乳菇发酵液抑菌活性成分为脂溶性物质,滤液的抑菌效果比菌体溶液的抑菌效果好。石油醚萃取液对沙门氏杆菌(S1)抑制作用最强,其次为地衣芽孢杆菌(F1);乙酸乙酯萃取液对巴氏杆菌和大肠杆菌(E)的抑制作用最强,其次是沙门氏杆菌(S1);正丁醇萃取液对沙门氏杆菌(S8)的抑制作用最强;乙醚萃取液对病原菌的抑制作用均较弱。6.采用硅胶柱层析对红汁乳菇发酵液进行初步分离,结果得到了2个有抑菌活性的组分(S4和S12)。经薄层层析表明S4和S12具有较大的共轭体系(苯环,共轭双键等),本试验未得到抑菌活性单体。
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