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目的:研究经口给与氯化钾(KCl)对三甲基氯化锡(TMT)染毒动物的治疗作用以及TMT对肾脏氢钾ATP酶蛋白表达的影响作用。
方法:(1)采用霍恩法测定三甲基氯化锡在大鼠、小鼠和兔的腹腔注射和经口途径的LD50,同时对染毒后的大鼠、小鼠和兔进行血清学离子(钾、钠、氯)分析。(2)采用按体重随机分组原则,将36只雌性SD大鼠分为6组,每组6只,分别设定为:模型对照组,低、中、高剂量KCl治疗组,空白KCl组和空白对照组。在给药后第1d和第6d做24h代谢试验,收集尿液做离子分析和PH值测定。在第7d心脏采动脉血进行血气分析,通过股动脉采血处死动物,分析血中离子和生化指标。取动物肾脏组织进行匀浆测定钠钾ATP酶和氢钾ATP酶活力。另取肾脏组织-80℃保存,解剖动物取重要的脏器,计算脏器系数和做肾脏的病理学检查。(3)将大鼠的肾脏组织做免疫组织化学,并将所保存肾脏组织经过膜蛋白试剂盒提纯处理后,用10%SDS—PAGE胶分离蛋白,用小鼠来源的氢钾ATP酶β亚基蛋白单克隆抗体结合,用ECL化学发光法和X光胶片曝光处理。
结果:TMT的雌雄大鼠经口途径LD50均为14.7mg/kg,雌性小鼠的腹腔注射LD50为3.16mg/kg,经口LD50为4.64mg/kg,雄性小鼠腹腔注射LD50为3.83mg/kg,经口LD50为3.16mg/kg,雌性兔腹腔注射LD50为3.16mg/kg,经口为2.61mg/kg,雄性兔腹腔注射LD50为2.61mg/kg,经口为3.16mg/kg。通过对染毒组大鼠、小鼠和兔的血清进行离子分析,与对照组进行比较发现血清钾有明显的下降,血钠和血氯变化不明显。TMT染毒后的动物有体重减轻,尿量,尿钾增多,尿PH值升高和血钾下降等离子和血中AST、ALT、CK、CK—MB、LDH、HBDH等生化指标的改变。TMT模型对照组肾脏氢钾ATP酶活力降低,通过KGl治疗的三个剂量组主要症状出现较模型对照组时间推迟。肾脏氢钾ATP酶活力较为治疗组动物有所增高,但仍低于空白对照组。同时TMT中毒对肾脏钠钾ATP酶活力影响不大。肾脏氢钾ATP酶β亚基蛋白免疫印迹结果显示,TMT染毒组和对照组动物肾脏氢钾ATP酶β亚基蛋白表达无明显差异。
结论:TMT对不同种属动物的急性毒性不同,但均可引起血钾下降。KCl对TMT的抑制肾脏氢钾ATP酶活力有一定的拮抗作用,同时,TMT中毒早期(6d)不会对肾脏氢钾ATP酶β亚基蛋白表达产生影响。