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目的:将TGF-β1和D-半乳糖对耳蜗螺旋韧带纤维细胞的拟老化作用相对比,并初步探讨其机制。方法:出生3天左右的SD大鼠的乳鼠,取耳蜗外侧壁,II型胶原酶消化后,用DMEM/F12(含10%胎牛血清)培养基培养螺旋韧带纤维细胞。CCK8分别检测TGF-β1和D-半乳糖在不同的浓度梯度和不同的作用时间下纤维细胞的活性,并与未加药物时纤维细胞的活性相对照,确定D-半乳糖和TGF-β1的最佳处理浓度和处理时间。然后将实验分为三组:TGF-β1组(8ng/ml)、D-半乳糖组(8mg/ml)、对照组,处理时间为48h。PI染色后流式细胞仪分别检测TGF-β1组、D-半乳糖组和对照组的细胞周期。β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况。Western blot检测各组间纤维细胞的增殖细胞核抗原PCNA。PCR检测三组间耳蜗螺旋韧带纤维细胞的bmi1和p16INK4a m RNA表达水平。Western blot检测各组间纤维细胞Bmi1、p16INK4a的蛋白表达水平。结果:CCK8:TGF-β1、D-半乳糖处理后与对照组相比细胞的活性均减低。TGF-β1与对照组相比有统计学意义的最小处理浓度和处理时间为8ng/ml,48h,D-半乳糖与对照组相比有统计学意义的最小处理浓度和处理时间为8mg/ml,48h。该浓度和处理时间下,TGF-β1组和D-半乳糖组均出现细胞衰老。TGF-β1组和D-半乳糖组与对照组相比G0-G1期比例增大,细胞多滞留于G1期。增殖细胞核抗原(PCNA)与对照组相比TGF-β1组和D-半乳糖组表达均减少(p<0.05).RT-PCR显示,与对照组相比,TGF-β1组P16INK4a m RNA增多(p<0.05),Bmi1 m RNA增加不明显,未见统计学差异。D-半乳糖组Bmi1 m RNA减少(p<0.05),p16INK4a m RNA增多(p<0.05)。Western blot:与对照组相比,TGF-β1组P16INK4a表达增加(p<0.05),Bmi1增加不明显,未见统计学差异。D-半乳糖组Bmi1表达减少(p<0.05),p16INK4a表达增加(p<0.05)。结论:TGF-β1可能是通过增加p16INK4a的表达引起耳蜗螺旋韧带纤维细胞的衰老,但其引起p16INK4a增加的机制可能并不是通过调节Bmi1的表达实现。D-半乳糖引起纤维细胞衰老的机制可能是通过降低Bmi1的表达,使Bmi1抑制p16INK4a表达的作用减弱,从而使p16INK4a的表达增加,引起纤维细胞的衰老。