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近年来肿瘤靶向药物的研发为肿瘤治疗带来了新前景,靶向抗肿瘤药物特异性选择作用部位,毒副作用小且部分可逆。细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4/6（cyclin-dependent kinase4/6）是影响肿瘤细胞的增值与分化的主要因素,针对CDK4/6是靶向治疗癌症的一个重要靶点。犬乳腺肿瘤常发生在未绝育母犬中,且随着年龄的增长发病率越高,人乳腺癌的发生也常见于高龄女性。CDK4/6在犬及人乳腺肿瘤中都呈现高表达。哌柏西利（palbociclib）是首个上市的CDK4/6抑制剂,在乳腺癌临床治疗上得到广泛应用,其作用机制为通过阻断细胞周期G1到S期的过程来抑制肿瘤细胞的增殖。研究发现CDK4/6抑制剂在其他癌症中也表现出一定抗癌作用如犬乳腺癌、恶性黑色素瘤等。本研究中采用MTT（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide）比色法以及动物移植瘤实验法筛选出具有抗肿瘤活性的新型药物CDK4/6抑制剂。133个受试药物分别为CD1、CD2、CD3、…CD133,哌柏西利作为对照药物,以REM 134、B16、MCF-7、MDA-MB-231、Hela、HCT116、A549、U87细胞株进行抗肿瘤药物的体外筛选。MTT比色法实验步骤:在96孔无菌培养板加入100μL/孔细胞浓度为5×105-1×106/m L的细胞悬液,置于培养箱过夜后加入设置好的不同浓度梯度的药物,每种药物设置6个浓度梯度,每个浓度设置3个复孔,药物作用48 h后,每孔加入10μL MTT溶液继续作用4h,吸弃上清,每孔加入150μL DMSO,使用酶标仪在570 nm波长处检测吸光度OD值,计算药物对细胞的抑制率与IC50（半数抑制浓度）值。根据MCF-7、MDA-MB-231、Hela、HCT116、A549细胞株检测药物CD1、CD2、CD3、…CD133的抗癌活性实验结果筛选出抗癌活性强的药物CD3、CD8、CD16、CD46号,以REM134、MCF-7、B16、U87四种细胞株继续检测这四种药物的抗癌活性（重复3次）。试验结果:REM 134细胞株中:药物CD3的IC50值为0.47±0.02μmol/L,药物CD8的IC50值为7.63±2.51μmol/L,药物CD16的IC50值为18.15±1.67μmol/L,药物CD46的IC50值为7.59±0.52μmol/L;MCF-7细胞株中:药物CD3的IC50值为0.41±0.01μmol/L,药物CD8的IC50值为7.05±0.16μmol/L,药物CD16的IC50值为1.52±0.04μmol/L,药物CD46的IC50值为0.43±0.04μmol/L;B16细胞株中:药物CD3的IC50值为3.97±0.55μmol/L,药物CD8的IC50值为2.20±0.42μmol/L,药物CD16的IC50值为4.31±1.06μmol/L,药物CD46的IC50值为6.21±0.46μmol/L;U87细胞株中:药物CD3的IC50值为7.51±0.06μmol/L,药物CD8的IC50值为2.72±0.09μmol/L,药物CD16的IC50值为9.54±0.76μmol/L,药物CD46的IC50值为5.06±0.04μmol/L（P<0.05）。其中REM 134细胞株对CD3最敏感,MCF-7细胞株对CD3最敏感,B16细胞株对CD8最敏感,U87细胞株对CD8最敏感,CD3对REM134、MCF-7细胞株抑制作用最高,CD8对B16细胞株抑制作用最高。基于体外细胞筛选实验结果以CD3、CD8作为动物试验受试药物,REM 134、B16、MCF-7三种细胞建立小鼠体外移植瘤模型。以CD8作为抗小鼠黑色素瘤（B16）活性的受试药物,CD3作为抗犬乳腺癌（REM 134）、抗人乳腺癌（MCF-7）活性的受试药物,哌柏西利作为对照药物。实验设置模型组、高剂量组（60 mg/kg）、中剂量（40 mg/kg）、低剂量组（20 mg/kg）、哌柏西利组（60 mg/kg）。给药途径为口服,给药疗程:犬乳腺癌试验组连续给药21天,小鼠黑色素瘤试验组连续给药14天,人乳腺癌试验组连续给药21天。试验结果:在犬乳腺癌试验中高剂量组对肿瘤的抑制率为50.89%,中剂量组抑制率为39.90%,低剂量组抑制率为15.15%,哌柏西利组对肿瘤的抑制率为48.71%。在小鼠黑色素瘤试验中高剂量组抑制率为40.12%,哌柏西利组抑制率为40.55%,中剂量组抑制率为17.31%,低剂量组抑制率为6.90%;在人乳腺癌试验中,高剂量组抑制率为48.71%,哌柏西利组抑制率为43.48%,中剂量组抑制率44.38%,低剂量组抑制率33.04%。结论:采用体内外两种药物筛选方法筛选出具有抗犬乳腺肿瘤、小鼠黑色素瘤、人乳腺癌活性的新型CDK4/6抑制剂CD3、CD8,抑制肿瘤效果呈剂量依赖性,每组小鼠体重无显著变化,实验结束时无死亡,表明受试药物无严重毒副作用,给药剂量是在相对安全剂量范围内,该研究为下一步药物的安全性评价以及作用机制等研究提供参考依据。