肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,调查显示,全球每年约有150万人死于肺癌,其中约90%的病例是死于肺癌的转移。此外,尚有大量确诊的伴有远处转移的晚期病例,转移灶的临床治疗十分困难,使得肺癌死亡率居高不下。因此,进一步阐明肺癌侵袭转移的精确分子机制,提供新的治疗靶点,从而提高肺癌治疗水平具有重要意义。C5aR为补体5片段受体(complement component5a receptor),属G蛋白偶联受体。最初发现C5aR主要表达在髓系来源细胞,后来发现支气管肺泡上皮、肝细胞等多种组织器官中也有一定的表达。C5aR作用广泛,与配体C5a结合参与了一系列炎症反应,如：诱导中性粒细胞趋化,促进中性粒细胞脱颗粒及髓过氧化物酶(MPO)释放,分泌IL-6、11--8及TNF-α等细胞因子。同时,C5aR参与了肝脏损伤肝实质细胞再生过程。近年来C5aR在肿瘤中的作用,受到人们关注。最早Buchner RR等在人的肝癌细胞表面发现功能性C5aR的高表达,相反正常肝细胞C5aR表达很低。Hidetoshi Nitta等发现C5aR在多种肿瘤细胞上均有一定的表达,CSaR促进了胆管细胞癌的侵袭通过释放基质金属蛋白酶。但C5aR在非小细胞肺癌侵袭及转移中的作用尚未有明确报道,其在肿瘤侵袭转移中的机制仍需进一步研究,因此,本实验通过研究非小细胞肺癌内C5aR的表达,研究其与肺癌发生发展及预后的相关性,通过干扰C5aR表达,探讨C5aR促进非小细胞肺癌侵袭转移的具体机制。第一部分C5aR在非小细胞肺癌组织及细胞系中的表达研究首先,我们通过荧光定量PCR检测非小细胞肺癌细胞株(A549、H1355、H460、95-C、95-D)及正常支气管上皮细胞株16HBE中的C5aR的表达。其次,通过western blot我们检测6例非小细胞肺癌组织及相应癌旁组织内C5aR的表达情况。结果表明：无论在细胞株水平还是组织水平,C5aR在非小细胞肺癌内的表达均显著高于正常组织,提示C5aR有可能参与了非小细胞肺癌的发生发展。第二部分干扰C5aR对非小细胞肺癌细胞株生物学功能的影响为研究C5aR与非小细胞肺癌侵袭转移的关系,我们化学合成了3对不同的siRNA,通过脂质体转染技术,检测转染后C5aR的表达情况,结果显示3对引物均对C5aR有干扰效果,其中S3效率最高,差异均具有统计学意义(p<0.01)。通过CCK-8、克隆形成实验、细胞周期、凋亡及Transwell和细胞划痕实验进一步检测干扰C5aR后对非小细胞肺癌细胞株生物学功能的影响,并进一步通过裸鼠皮下移植瘤模型验证。已知C5aR参与了晶状上皮的上皮间质转化,进一步通过干扰C5aR后检测细胞形态及上皮问质表型变化验证其在肿瘤上皮间质转化中的作用。结果表明：干扰C5aR后显著抑制非小细胞肺癌细胞株A549的增殖能力、克隆形成能力、成瘤大小及侵袭转移能力。干扰C5aR后细胞E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调,C5aR参与了非小细胞肺癌上皮间质转化。第三部分C5aR表达与肺癌临床病理特征及预后的关系鉴于细胞水平的结果,我们通过免疫组化检测组织芯片内208例非小细胞肺癌内C5aR的表达情况,统计其与肺癌临床病理特征及预后的关系,研究C5aR表达与肺癌临床病理特征及预后的关系。结果表明：C5aR表达与非小细胞肺癌淋巴结转移显著相关(p<0.05),组织内C5aR的表达与E-cadherin表达负相关(p<0.01)。Kaplan-Meier分析显示：肺癌分期、淋巴结转移、肿瘤直径>3cm及C5aR高表达患者总体生存率(Overall survival)差,Cox多因素提示C5aR表达、肿瘤分期、淋巴结转移及肿瘤直径是患者独立预后因素。第四部分C5aR促进非小细胞肺癌侵袭转移的机制研究C5aR是如何促进非小细胞肺癌侵袭及转移呢,已知C5aR下游主要通过AKT和MAPK通路,通过干扰C5aR后,western blot检测AKT、ERK、p38及MMPs等表达情况。结果表明：C5aR通过激活AKT抑制了细胞凋亡,C5aR促进了MMP-9及MMP-2的表达,C5aR可能通过磷酸化ERK促进了非小细胞肺癌上皮间质转化。