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冻绿(Rhamnus utilis),为鼠李科鼠李属的一种植物,广泛分布在我国海拔1500米以下的地区,其各个部位都含有丰富的黄酮类物质,有抗氧化、抑菌、消炎、镇痛、保肝等作用,因此冻绿可作药材使用,但是关于冻绿的研究却很少。本实验针对冻绿叶中的黄酮类化合物展开了研究,在之前实验的基础上,通过单因素和响应面实验确定了冻绿叶黄酮纯化的最优条件,进一步用高效液相色谱法对纯化后的冻绿叶黄酮进行了定性和定量分析,最后对比了纯化前的冻绿叶黄酮和纯化后的冻绿叶黄酮的抗氧化性和抑菌性的强弱。为完善冻绿叶黄酮的药理作用提供理论依据。具体的研究内容和结果如下:1.从HPD-600、NAK-9、AB-8、LX-28、LSA-21、X-5、D101七种不同型号的大孔树脂中,运用静态吸附解吸实验筛选分离纯化效果最好的树脂,综合比较不同型号大孔树脂的参数,确定AB-8型号为理想的大孔树脂,接着选取了上样液pH、上样液流速、洗脱速率、洗脱液浓度四个因素进行了冻绿叶黄酮纯化的单因素实验,在此基础上,设计响应面实验,根据软件分析结果和实际的可操作性,得出冻绿叶黄酮纯化的适合条件为:上样液pH 3.5、上样液流速1 mL/min、洗脱速率2.5 mL/min、洗脱液浓度95%,该条件下冻绿叶黄酮的回收率达到了65.98%。2.运用高效液相色谱法,在合适的液相色谱条件下,以黄酮的保留时间为依据,确定了冻绿叶中的黄酮单体有芦丁和山柰酚,在方法学考察中:加样回收率在96%-98%之间,重复性、稳定性、精密度试验RSD<3.0%,芦丁和山柰酚分别在180-900、3-20 ug/mL范围内,峰面积与浓度呈线性关系,因此可以准确测定得出冻绿叶黄酮中芦丁的含量为0.698 ug/ug,山柰酚的含量为0.016 ug/ug。3.通过FRAP法、ABTS法、羟自由基比色法、DPPH法对比了未纯化冻绿叶黄酮和纯化后冻绿叶黄酮的抗氧化性,得出:纯化前后的冻绿叶黄酮的抗氧化性都随着浓度的升高而增强,而且在同一浓度下,纯化后的冻绿叶黄酮的抗氧化性都强于纯化前的冻绿叶黄酮。运用抑菌圈法,探究了纯化前后冻绿叶黄酮对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌性,结果表明浓度越高,抑菌作用越明显,且纯化后的冻绿叶黄酮的抑菌性强于未纯化的,综合对比四种菌,在同一浓度条件下,抑制作用由强到弱依次为金黄色葡萄球菌>枯草芽孢杆菌>大肠杆菌>沙门氏菌。