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庆大霉素是一类氨基糖苷类抗生素,在临床治疗和动物养殖中有着广泛应用。过量的抗生素使用对人类和环境存在危害。由于环境样本中庆大霉素含量很低,对分析方法灵敏度有较高要求。以酶联免疫分析方法为代表的生物分析方法,具有灵敏度高、检测快速、操作简便等优点,成为环境中污染物快速分析的新方向。本文通过制备的庆大霉素单克隆抗体,初步建立了基于碳纳米管免疫新方法。采用直接化学交联法成功制备了免疫原GEN-BSA和包被原GEN-OVA,紫外扫描鉴定证明反应产物交联成功。用免疫原免疫小鼠,三只小鼠抗庆大霉素血清达到预期抑制要求,选取其中抑制率最高的小鼠进行细胞融合,细胞融合后用间接竞争ELISA方法筛选出6株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞分别为2G5D12、2G5F8、2G5E7、2G5D7、2G5F5G7、2G5F5H7,试验对六株杂交瘤分泌的抗体进行亚型鉴定,结果显示单克隆抗体重链均为IgG 2a型,轻链为K型。选取2G5D12细胞株制备腹水,通过体内诱导法大量制备单克隆抗体,腹水经辛酸-硫酸铵法纯化得到纯化单克隆抗体。对实验条件进行优化,采用抗原抗体最佳工作浓度和最优条件绘制竞争抑制曲线,根据拟合曲线计算得检测限(IC90)为0.026 ng/mL,半数抑制(IC50)为0.095 ng/mL,线性范围(IC80-IC20)为0.042~0.2438 ng/mL。2G5D12单克隆抗体除了对妥布霉素有0.31%的交叉反应率,和链霉素、新霉素、卡那霉素、核糖霉素、阿米卡星的交叉反应率均在0.01%以下。实验回收率范围为74.3~126.8%,变异系数小于13.2%。试验稳定性良好。对环境样本庆大霉素含量进行分析,江苏大学环境水样中庆大霉素含量在0.04~0.1 ng/mL,而土壤中庆大霉素含量中在0.115~0.167 ng/mL。牛奶样品中,庆大霉素含量在0.832~1.075 ng/mL;在动物组织中庆大霉素残留量为1.946~3.577 ng/g,均未超出最高残留限量。合成GEN-HRP,并采用两种方法将二抗偶联碳纳米管;讨论碳纳米管合成产物非特异性结合;优化实验条件后,选取2%BSA作为稀释液,MWCNTs-PEG-GAM作为载体。建立了基于碳纳米管的离心定量方法和过滤定性方法。离心定量法获得庆大霉素抑制曲线,根据拟合曲线计算得检测限(IC90)为0.048 ng/mL,半数抑制(IC50)为0.195 ng/mL,线性范围(IC80~IC20)为0.080~0.512 ng/mL。实验测定四种样品回收率和重复率,回收率范围为60.1~135.4%,变异系数小于18.7%。试验稳定性良好。过滤定性法在0.1 ng/L颜色变浅,1 ng/L颜色消失。对环境样本庆大霉素含量进行分析,江苏大学环境水样中庆大霉素含量在0.07~0.146 ng/mL,而土壤中庆大霉素含量在0.198~0.38ng/g;定性分析6、7、10号水样,结果为阴性,9、11、13号土壤样品为阳性。