目前全世界有超过3.5亿的人群感染乙型肝炎病毒(HBV), HBV感染已成为严重的公共卫生负担。目前α干扰素已被广泛应用于临床治疗慢性HBV感染;而在人体感染HBV的过程中,Y干扰素通过协调固有免疫和获得性免疫,也能起到抗病毒的作用。干扰素和细胞表面的受体结合,通过Jak-Stat信号通路诱导产生很多ISG,为了进一步阐明干扰素抗病毒的具体机制,我们开展了三部分的研究工作。在第一部分工作中,我们证实IFN-α和IFN-γ能够在人肝癌细胞来源细胞里抑制HBV复制,接着我们挑选了38个在肝细胞里干扰素诱导后高表达的ISG,通过在肝细胞内共转染ISG和HBV质粒来寻找哪些ISG具有抑制HBV复制的能力。研究发现：有8个ISG抑制HBV DNA的幅度超过40%,其中6个ISG主要作用于HBV RNA(包括锌指蛋白hZAP-S);另外2个ISG(APOBEC 3G和IDO),能够显著的抑制HBV DNA,但是没有影响HBV RNA。在第二部分工作中,我们研究了IDO抑制HBV复制的机制。研究发现Y干扰素刺激产生的IDO基因通过降解色氨酸,能够强有效地抑制细胞内HBV DNA复制,同时又不影响HBV RNA复制。进一步研究发现,过表达酶活性失活状态的IDO,不能起到抑制HBV复制的作用,同时发现在IDO过表达的细胞里,如果补充了色氨酸,HBV复制水平又恢复了正常,这提示IDO的抗病毒作用通过降解色氨酸来完成。有趣的是,IDO介导的色氨酸缺乏能够选择性地抑制病毒的蛋白翻译,从而影响病毒复制,但是对于细胞整体的蛋白合成水平并没有显著的影响。最后,我们的研究发现：在γ干扰素处理的肝细胞里面,补充色氨酸能够彻底恢复HBV的复制水平,而在α干扰素处理的肝细胞里面,则没有上述现象,这就提示对于人肝癌细胞来源的细胞,ID0在Y干扰素介导的抗病毒机制中可能起到主导作用。在第三部分工作中,我们研究了ZAP抑制HBV复制的机制。以往研究表明：ZAP是一个干扰素诱导产生的能够抑制很多RNA病毒复制的宿主因素。鼠ZAP(rZAP)通过锌指结构与RNA病毒基因组里的ZAP反应区域(ZRE)相结合,然后在细胞浆里招募外切体来降解RNA。我们研究发现人锌指蛋白(hZAP)能够在肝细胞里本底表达,并且可以被α干扰素和IPS-1诱导表达增强,同时发现转染hZAP可以明显降解HBV前基因组RNA和亚基因组RNA。通过荧光报告基团实验发现：hZAP没有明显降低HBV核心启动子的活性,提示hZAP的降解发生在转录后水平。和以往报道不同的是,hZAP对HBV RNA的降解发生在细胞核里。进一步的研究表明,hZAP的抗病毒能力和病毒的核心蛋白、聚合酶无关。和鼠锌指蛋白(rZAP)相似,截掉C端的hZAP仍保留了抗病毒能力,这提示N端的锌指结构是hZAP抗病毒的功能区域。诱变研究表明4个锌指结构的完整性对于hZAP抑制HBV病毒的活性至关重要,同时HBV基因里的ZRE定位在HBV pgRNA的末端冗余序列(ntl820一1918)。此外siRNA研究证实：hZAP是抑制HBV复制的宿主因素,同时hZAP在IPS-1诱导的HBV RNA降解中也起到部分作用。