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胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤,约占颅内肿瘤的40~60%,患者中位生存期只有12~15个月。由于胶质瘤具有侵袭性生长的特性,外科手术只能在安全限度内最大限度地切除病灶,改善患者症状,无法将肿瘤完全切除;术后辅以化疗与放疗以期尽可能地杀灭残余肿瘤细胞。但即便采用一系列的综合治疗措施,但疗效仍不理想。胶质瘤的常用化疗药物为替莫唑胺和尼莫司汀,通过造成DNA分子O6-甲基鸟嘌呤甲基化,导致碱基错配并最终诱导细胞凋亡。胶质瘤细胞高表达MGMT钝化其细胞毒作用,是替莫唑胺等化疗药物治疗胶质瘤失败的重要原因,因此探寻具有不同作用机制的新型高效胶质瘤化疗药物显得尤为重要。 青蒿素是从中草药青蒿中提取出来的具有抗疟作用的主要物质,在体内的主要活性成分为双氢青蒿素。目前有研究表明,双氢青蒿素对多种肿瘤细胞具有强烈的细胞毒作用,而对正常细胞的存活几乎不造成影响。结合以往抗疟治疗的临床实践,在有效药物浓度范围内的青蒿素对人体无明显的毒副作用,且由于双氢青蒿素为脂溶性药物,易于穿透血脑屏障到达病灶,可用于脑型疟疾。因此,新发现的青蒿素肿瘤杀伤作用有可能为探寻新一代的胶质瘤化疗药物提供方向。 研究目的: 1、观察并验证双氢青蒿素对胶质瘤GL261细胞增殖抑制与凋亡诱导作用; 2、研究双氢青蒿素对GL261荷瘤小鼠生存期的影响; 3、探索双氢青蒿素诱导胶质瘤GL261细胞凋亡的可能效应机制。 研究内容和方法: 1、双氢青蒿素诱导胶质瘤GL261细胞凋亡的研究:以小鼠源性GL261细胞为主要研究材料,采用CCK-8技术、划痕实验、免疫荧光染色技术、AnnexinⅤ FITC/PI凋亡检测技术、Western Blot技术等手段,观察双氢青蒿素在不同浓度、不同作用时间下诱导胶质瘤GL261细胞凋亡的作用;建立GL261原位移植瘤模型,观察双氢青蒿素是否可延长荷瘤小鼠的生存期; 2、STAT3功能抑制在双氢青蒿素诱导胶质瘤GL261细胞凋亡中的研究:采用免疫荧光染色技术和Western Blot技术,初步探讨双氢青蒿素是否能改变胶质瘤GL261细胞中STAT3活化及其在凋亡诱导中的作用。 主要结果和结论: 1、双氢青蒿素可以显著抑制胶质瘤GL261细胞的增殖活性:双氢青蒿素可显著改变GL261细胞体外培养的细胞状态,产生明显的细胞毒效应,具有剂量依赖性和时间依赖性(n=4,P<0.05); 2、双氢青蒿素选择性抑制胶质瘤GL261细胞的增殖活性:双氢青蒿素对正常组织来源的原代星形胶质细胞和肾小管内皮细胞增殖抑制作用显著小于对GL261细胞的抑制作用(n=4,P<0.05),且无剂量依赖性; 3、双氢青蒿素可以显著诱导胶质瘤GL261细胞凋亡:表现为双氢青蒿素可以显著增加AnnexinⅤ+细胞的比例(n=4,P<0.05),上调激活型Caspase-3的表达(n=4,P<0.05),且与细胞核共定位; 4、双氢青蒿素对胶质瘤GL261细胞增殖的抑制作用强于尼莫司汀:在治疗剂量范围内,各浓度组的双氢青蒿素对GL261细胞的增殖抑制作用均显著强于尼莫司汀,且中、低剂量尼莫司汀耐受的GL261细胞仍对双氢青蒿素敏感(n=4,P<0.05); 5、双氢青蒿素腹腔给药可显著延长荷瘤小鼠的生存期:双氢青蒿素90mg/kg/天连续腹腔给药能显著延长荷瘤小鼠生存期,中位生存期延长4天(n=10,P<0.05); 6、双氢青蒿素对胶质瘤GL261细胞的凋亡诱导作用可能通过抑制STAT3信号通路实现:双氢青蒿素以剂量依赖的方式降低STAT3的磷酸化水平,而且能够阻滞磷酸化的STAT3二聚体进入细胞核。