论文部分内容阅读
目的：1建立人单纯疱疹病毒Ⅰ型(Herpes simplex virus, HSV-1)感染人星形胶质瘤细胞U251的模型。明确Ginsenoside Rb1(GRb1)对HSV-1感染导致的U251凋亡异常的干预效果并确定有效的药物浓度；2研究GRb1对HSV-1感染导致的U251细胞神经营养素家族表达异常的抑制作用。材料和方法：1以MOI (multiplicity of infection)等于5的HSV-1感染U251细胞建立感染模型。设立GRb1组、GRbl+HSV-1组、HSV-1组和对照组,倒置显微镜观察细胞形态学改变。采用MTT比色法检测HSV-1感染后U251细胞增殖的变化；Guava Nexin(?) Reagent试剂盒流式细胞术检测U251细胞凋亡比率的变化。2设立GRb1(400μg/ml)组、GRbl+HSV-1(400μg/ml)组、HSV-1组和对照组,RT-PCR方法检测感染6h、12h、24h、36h和48h后GRb1(400μg/ml)组、GRb1+HSV-1(400μg/ml)组、HSV-1组和对照组NGF mRNA和BDNF mRNA的表达情况。Western blot方法检测12h、24h、36h和48h后各组NGF的蛋白表达情况。结果：1MTT法结果显示HSV-1组MTT值始终低于对照组(P<0.05), GRb1(400μg/ml)组各时间段MTT值均高于对照组(p<0.05)。GRbl+HSV-1(400μg/ml)组感染HSV-1后的各时间段MTT值均高于HSV-1组(P<0.05)。对照组形态学观察HSV-1组细胞感染12h后开始出现融合,24h融合增多,36h后出现细胞病变效应(CPE),GRbl+HSV-1(400μg/ml)组细胞感染24h后开始出现少量融合,36h后融合增多,但大部分细胞为正常形态；流式细胞术显示：GRbl+HSV-1(400μg/ml)组凋亡率在各时间段均低于HSV-1组(P<0.05)。2RT-PCR结果显示：GRb1(400μg/ml)组和GRbl+HSV-1(400μg/ml)组在感染HSV-1早期6h-12h NGF mRNA表达降低(P<0.05),但在感染24h,36h,48h表达增高且分别明显高于对照组和HSV-1组(P<0.05)。但检测BDNF mRNA在12h-48h各处理组之间无明显差异。Western blot结果显示：GRb1+HSV-1(400μg/ml)组在感染HSV-1早期12h-24h NGF蛋白表达降低(P<0.05),在感染36h,48h表达增高且明显高于HSV-1组(P<0.05)。结论：1U251细胞是HSV-1的完全容许细胞。2400μg/ml的GRb1不会引起细胞凋亡但能够抑制HSV-1感染所致U251细胞的凋亡。3400μg/ml的GRb1能够抑制HSV-1感染导致U251细胞NGF的表达异常。