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同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)是一种含硫氨基酸,是蛋氨酸循环的中间代谢产物,目前高Hcy是公认的导致血管内皮细胞功能障碍的独立危险因子。内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)氧化L-精氨酸产生的一氧化氮(nitric oxide,NO)在心血管生理及病理生理过程中发挥重要作用,内皮细胞功能障碍主要与NO生成减少及超氧阴离子(O2.-)生成增加有关。eNOS活性的调节可以发生在eNOS的转录、胞内转位、eNOS复合物形成以及eNOS氨基酸残基磷酸化等多个环节,热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)和小凹蛋白(Caveolin-1)是eNOS活性的重要调节蛋白。Hcy对eNOS活性调节的研究多集中在转录和蛋白表达水平,且结论不一,值得进一步研究。Hcy是否通过影响eNOS相互作用蛋白HSP90和Caveolin-1的表达调节其活性?未见报道。目的:在原代培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)基础上,通过施加钙离子导体(A23187),研究Hcy对静息和激活状态下内皮功能的影响,并观察HSP90和Caveolin-1在其中的作用,进一步阐明Hcy导致内皮细胞功能障碍的机制。方法:收集HUVEC进行细胞培养并做Ⅷ因子相关抗原鉴定,取第二代细胞分四组:对照组,Hcy组,A23187组和Hcy+A23187组。继续培养24小时后,免疫细胞化学的方法检测HUVEC中Caveolin-1、HSP90及P-eNOS蛋白含量,RT-PCR方法测HUVEC中eNOSmRNA的表达,比色法测细胞培养液中eNOS活性、NO含量,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量。结果:(1)与对照组相比,Hcy组培养液中eNOS活性减弱、NO含量降低、SOD活力增强、MDA含量升高(P<0.05),A23187组eNOS活性增强、NO含量升高、SOD活力增强、MDA含量降低(P<0.05);与A23187组相比,Hcy+A23187组eNOS活性减弱、NO含量降低、MDA含量升高(P<0.05),Hcy不影响A23187激活状态下SOD活力的升高(P>0.05);(2)与对照组相比,Hcy组Caveolin-1蛋白表达增高(P<0.05);与A23187组相比,Hcy+A23187组Caveolin-1蛋白增高(P<0.05);(3)各组HUVEC中eNOS mRNA表达、HSP90表达、P-eNOS蛋白含量无差异(P>0.05)。结论:(1)Hcy可以导致静息及激活状态下内皮细胞功能障碍,主要表现为eNOS活性减弱,NO合成和释放减少;其机制可能与Hcy引起的氧化应激和(或)NO生物利用度降低有关;(2)Hcy引起的eNOS活性降低可能与eNOS转录无关;(3)Hcy可能通过增强Caveolin-1蛋白表达,减少HSP90和eNOS复合物的形成,降低了eNOS活性。