【摘 要】
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目的在实际养猪生产中,集约化规模化饲养、高温、高海拔等环境因素是引起母猪氧化应激的主要因素。氧化应激可诱导猪卵巢颗粒细胞凋亡,导致卵泡异常闭锁,降低可用卵泡的数目,从而降低母猪的繁殖性能。美洲大蠊小肽（美蠊小肽）分离于美洲大蠊虫体,具有较强的体内外抗氧化活性。本文的研究目的是探讨美蠊小肽对H2O2诱导的猪卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用及其抗凋亡的具体信号通路,为提高母猪的产仔数、提升其繁殖效率奠定理论
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目的在实际养猪生产中,集约化规模化饲养、高温、高海拔等环境因素是引起母猪氧化应激的主要因素。氧化应激可诱导猪卵巢颗粒细胞凋亡,导致卵泡异常闭锁,降低可用卵泡的数目,从而降低母猪的繁殖性能。美洲大蠊小肽（美蠊小肽）分离于美洲大蠊虫体,具有较强的体内外抗氧化活性。本文的研究目的是探讨美蠊小肽对H2O2诱导的猪卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用及其抗凋亡的具体信号通路,为提高母猪的产仔数、提升其繁殖效率奠定理论基础,为美蠊小肽在畜牧生态养殖上的开发应用提供新的思路。方法采集和培养猪卵巢颗粒细胞,不同浓度的H2O2处理颗粒细胞不同时间,使用CCK-8法及流式细胞术检测细胞活力和凋亡率以确定建立细胞氧化应激模型的H2O2最适浓度及时间;不同浓度的美蠊小肽处理氧化应激颗粒细胞不同时间,CCK-8法检测细胞活力,测定丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）含量、活性氧（ROS）水平及超氧化物歧化酶（SOD）活性以确定美蠊小肽的最适修复浓度及时间;使用q RT-PCR、TUNEL法、蛋白免疫印迹和Fox O1质粒转染分析美蠊小肽对氧化应激猪卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用及其关键调控因子;最后使用蛋白免疫印迹、免疫共沉淀法、免疫荧光和细胞凋亡检测等分析美蠊小肽抵抗H2O2诱导猪颗粒细胞凋亡的信号通路。结果（1）100μmol/L H2O2处理6 h可显著降低卵巢颗粒细胞活力和诱导其发生凋亡,细胞凋亡率为32.95%（P＜0.01）;（2）400μg/m L美蠊小肽处理24 h后可明显改善H2O2刺激降低的细胞活力,显著降低H2O2诱导的氧化应激猪颗粒细胞中MDA和NO含量、ROS的水平,增加SOD的活性,下调凋亡相关基因Caspase-3、Bax和Fas L的m RNA水平,抑制H2O2诱导的猪颗粒细胞凋亡,且对细胞无损害作用（P＜0.01）;（3）与Fox O家族的其他成员相比,美蠊小肽对H2O2诱导的猪卵巢颗粒细胞中Fox O1的抑制效果最明显,可显著升高氧化应激猪卵巢颗粒细胞中p-Fox O1/Fox O1比值,降低Caspase-3的蛋白表达,过表达Fox O1后,美蠊小肽的作用效果相同（P＜0.01）;（4）美蠊小肽能够显著促进氧化应激猪卵巢颗粒细胞中Fox O1与14-3-3蛋白的结合、增加Fox O1转位至细胞质并降低Fox O1的乙酰化水平（P＜0.01）;（5）美蠊小肽显著降低H2O2诱导的颗粒细胞中p-JNK/JNK比值,增加p-Fox O1/Fox O1比值,从而降低Caspase-3表达量,减少细胞凋亡（P＜0.01）。结论美蠊小肽对氧化应激诱导的猪卵巢颗粒细胞凋亡有明显的抑制作用,主要通过调控Fox O1与14-3-3蛋白的相互作用以及JNK/Fox O1信号通路影响Fox O1的核质易位来抵抗氧化应激诱导的猪卵巢颗粒细胞凋亡,Fox O1的乙酰化修饰也参与其调控作用。
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