目的 CatSper1是一类特异表达于睾丸组织的潜在离子通道蛋白，仅位于成熟精子尾部主段，具有六个跨膜肽段（S₁～S₆），与体细胞电压依赖性钙离子通道的一个亚单位的一个功能区结构相似。敲除该基因的小鼠精子运动能力显著下降而且不育，因此CatSper1是一个潜在的避孕疫苗靶抗原。本研究旨在用基因工程方法构建带有分泌信号肽基因的重组质粒pPICZαA-Catsper1_S1-S6，导入毕赤酵母中进行表达，以获得具有免疫活性的CatSper1_S1-S6蛋白，为进一步的研究积累资料。 方法 以成年雄鼠睾丸组织总RNA为模板，RT-PCR扩增CatSper1_S1-S6基因片段（958bp-1749bp）。用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ对目的基因片段和载体pPICZαA进行双酶切，酶切产物经连接后导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中。筛选阳性单克隆，PCR初步鉴定后抽提重组质粒pPICZαA-Catsper1_S1-S6。EcoR Ⅰ、Sal Ⅰ双酶切及测序鉴定重组质粒以确定目的基因片段正确插入载体。获得正确的重组质粒后，Sac Ⅰ线性化该质粒，电穿孔导入毕赤酵母GS115，在含有Zeocin抗性板上筛选阳性单克隆。大量培养阳性单克隆，用甲醇诱导表达。表达的上清液经镍离子螯合层析纯化后，用SDS-PAGE和Western blotting对目的蛋白进行鉴定。 结果 RT-PCR结果显示从小鼠睾丸组织中扩增的目的基因片段大小与理论值一致：双酶切鉴定、测序结果证实目的基因片段正确插入到载体pPICZαA中；SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明获得分子量约为43kD的重组CatSper1_S1-S6成分。 结论 成功构建重组质粒pPICZαA-Catsper1_S1-S6；获得GS115-Catsper1_S1-S6表达菌株；重组Catsper1_S1-S6蛋白在毕赤酵母中实现了分泌表达。