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目的:通过网络药理学对苏木药效物质基础进行分析,并对其与血管再狭窄治疗相关靶点进行预测,通过实验研究进行验证。实验建立TNF-α诱导血管平滑肌细胞损伤模型和血管再狭窄大鼠模型,应用苏木提取物进行干预,观察苏木提取物抗血管再狭窄的作用及作用机制。方法:第一部分:苏木提取物干预血管再狭窄的网络药理学研究:通过网络药理学对苏木提取物干预血管再狭窄药效物质基础及作用机制进行研究,计算出其主要活性成分及潜在治疗靶点,第二部分:苏木提取物对体外血管平滑肌细胞增殖的影响。将血管平滑肌细胞分为5组,分别为空白组,模型组,PPAR激动剂组,PPAR抑制剂组,苏木组。采用TNF-α处理12h诱导血管平滑肌细胞损伤进行模型复制。空白组细胞正常培养24h;模型组细胞进行模型复制后正常培养12h;PPAR激动剂组,PPAR抑制剂组,苏木组进行模型复制后,分别加入PPAR激动剂,PPAR抑制剂,苏木提取物含药血清干预12h。观察各组细胞形态的变化,MTT法观察细胞增殖,流式细胞术观察细胞凋亡,Elisa法检测细胞上清液IL-2,IL-4水平,Western-blot法检测PPAR-γ,NFAT-4蛋白的表达。第三部分:苏木提取物对血管再狭窄的影响及其分子机制研究。本实验选取SD大鼠50只,随机数字表法将其分为5组,10只大鼠作为空白组,10只大鼠作为假手术组,假手术组大鼠只切口不插入钢丝,20只大鼠采用钢丝接触法造成大鼠股动脉再狭窄模型,后分为模型组10只,苏木组10只。另10只大鼠预先给药1个月后同上方法造模,各组大鼠造模28天后,连续灌胃28天。灌胃结束后HE染色进行血管组织形态学检测,免疫组化法检测血管平滑肌细胞内PPAR-γ和NFAT-4蛋白含量,Elisa法检测大鼠血清IL-2,IL-4,TNF-α,IFN-γ水平,RT-PCR法和Western-blot法检测病变股动脉PPAR-γ和NFAT-4的mRNA和蛋白质的表达。结果:1.网络药理学研究证明苏木提取物抗血管再狭窄机制可能是通过影响PPAR网络相关因子发挥抗血管再狭窄作用。2.细胞凋亡和增殖结果显示:与空白组相比,模型组TNF-α能显著增加血管平滑肌细胞增殖、晚期凋亡和总凋亡率,与模型组相比较,苏木组和PPAR激活剂组,可以抑制血管平滑肌细胞的增殖、降低晚期凋亡和总凋亡率,差异有统计学意义(P<0.05).3.细胞上清Elisa结果显示:与空白组比较模型组的IL-2,IL-4的含量升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组进行比较,苏木组和PPAR激活剂组的IL-2,IL-4的含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。4.细胞Western Blot结果显示:与空白组比较模型组的PPAR-γ与NFAT-4蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,苏木组、PPAR激活剂组的PPAR-γ蛋白表达升高、NFAT-4蛋白的表达水平降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。5.大鼠股动脉病理形态结果显示:模型组内皮细胞及内皮下层细胞水肿变性,中层平滑肌细胞排列紊乱,血管明显变狭窄、苏木组及预防组内皮细胞轻度肿胀,中层平滑肌细胞排列较紊乱,血管轻度狭窄,和模型组比较,病理损伤减轻;预防组损伤较苏木组病理损伤进一步减轻。6.大鼠股动脉免疫组化结果显示:正常血管中膜层中有少量PPAR-γ的表达,模型组血管损伤后其表达明显增加,新生内膜中大量PPAR-γ的表达,苏木组和预防组的PPAR-γ表达增加,新生内膜中可见大量的PPAR-γ表达。7.大鼠血清Elisa结果显示:与空白组比较,模型组的IL-2,IL-4,TNF-α,IFN-γ含量升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,苏木组、预防组的IL-2,IL-4,TNF-α,IFN-γ含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);与苏木组比较,预防组的IL-2,IL-4,TNF-α,IFN-γ含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。8.大鼠股动脉Western Blot结果显示:与空白组比较模型组的PPAR-γ和NFAT-4蛋白含量升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,苏木组和预防组的PPAR-γ蛋白表达升高、NFAT-4蛋白含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);与苏木组比较,预防组的PPAR-γ蛋白表达升高、NFAT-4蛋白含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。9.大鼠股动脉Real Time PCR结果显示:与空白组比较模型组的PPAR-γ和NFAT-4水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,苏木组和预防组的PPAR-γmRNA含量升高、NFAT-4mRNA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05);与苏木组比较,预防组的PPAR-γmRNA含量升高、NFAT-4mRNA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.通过网络药理学研究发现苏木提取物抗血管再狭窄机制可能是通过影响PPAR网络相关因子发挥作用。2.苏木提取物能够降低TNF-α诱导的血管平滑肌细胞增殖率,降低细胞凋亡率,降低细胞上清IL-2,IL-4含量。3.苏木提取物能改善血管再狭窄模型大鼠病变股动脉的病理损伤,并降低血管再狭窄模型大鼠血清IL-2,IL-4,TNF-α,IFN-γ水平。4.苏木提取物能够下调血管再狭窄模型大鼠及TNF-α诱导的血管平滑肌细胞损伤模型PPAR-γ和NFAT-4的表达,这可能是其防治血管再狭窄的作用机制之一。