论文部分内容阅读
目的:
大鼠急性脊髓损伤后,神经细胞的死亡方式包括坏死和凋亡。凋亡发生是一个复杂的,由Caspase家族成员介导的蛋白酶级联反应过程,Caspase-3是哺乳动物细胞凋亡中的关键蛋白酶,是凋亡下游的关键执行者。TNF-α释放后能特异性地与广泛分布于各种细胞膜表面的受体结合,激活Caspase-3导致细胞凋亡。本研究检测了TNF-α在大鼠压迫模型脊髓组织中的动态表达,并探讨了其与Caspase-3之间的相关性,为凋亡相关疾病的防治提供了思路和良好的理论基础。
方法:
取健康成熟SD大鼠70只,雌雄不限,体质量220-250g,由中国医科大学实验动物中心提供。随机分为:损伤组:脊髓损伤后2h、8h、24h、3d、7d共5个时间点,每个时间点10只;空白对照组:10只,不做任何处理:抑制剂组:脊髓损伤后皮下注射。TNF-α抑制剂(依那西普)0.36mg/kg,1d取材,10只。HE染色观察脊髓组织病理学变化,免疫组化测定各时间点TNF-α和Caspase-3的表达变化,原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)标记法(TUNEL,法)检测神经细胞的凋亡水平。采用SPSS17.0软件包进行统计,各组数据采用x±s表示,TNF-α、Caspase-3阳性细胞率及神经细胞凋亡细胞率各组比较采用方差分析。TNF-α、Caspase-3阳性细胞率与神经细胞凋亡细胞率相关性采用直线相关分析。以P<0.05为有差异,P<0.01为有显著性差异。
结果:
免疫组化结果显示正常组大鼠脊髓神经细胞TNF-α、Caspase-3、TUNEL阳性细胞率较少,脊髓损伤后8h,TNF-α阳性细胞率明显增多,1d达高峰,3d表达减弱。Caspase-3阳性细胞率在脊髓损伤后8h明显增多,1d达高峰,3d表达减弱。TUNEL阳性细胞率也在8h明显增多,1d达高峰,3d表达减弱。TNF-α抑制剂组TNF-α、caspase-3、TUNEL阳性细胞率明显减少。
结论:
脊髓损伤后存在广泛的细胞凋亡现象,TNF-α和Caspase-3均参与了神经细胞的凋亡调节,且TNF-α的表达和Caspase-3的表达呈正相关。