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本研究针对目前北京郊区推广种植的11个主要紫花苜蓿品种,选用具有代表性的16株根瘤菌菌株,进行了根瘤菌与紫花苜蓿共生有效性研究,用于筛选高效根瘤菌菌株;对于筛选获得的根瘤菌菌株XJ83097,采用GFP(greenfluorescentprotein)标记的方法研究其在苜蓿根围的竞争、定殖、分布情况及其对根际微生物区系的影响;利用原生质体融合技术将具有良好生防效果的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HL29与高效固氮根瘤菌菌株CCBAU83097进行了融合,从中获得了同时具有固氮和生防双重功效的融合子,并进行其部分生理生化性状,16SrRNA的基因序列测定和分析,进一步确定融合子的分类地位;平板法测定了F17的抑菌谱。通过室内和田间试验进行了供试融合子的固氮,促生和防病效果研究。构建了具有促生和固氮活性的生防菌。具体研究结果如下:
1.根瘤菌接种处理的生物学性状指标明显优于空白对照;不同根瘤菌菌株与同一苜蓿品种的共生结瘤效果具有明显的差异,同一种根瘤菌菌株拌种处理不同品种的紫花苜蓿也表现出不同的共生效果。其中根瘤菌菌株CCBAU83097与CW787和WL323等多个紫花苜蓿品种具有高效共生固氮活性。
2.GFP标记的CCBAU83097能够定殖于紫花苜蓿植株的根围、根表和根内等部位;播种60d后植株根围土中标记的菌量为104cfu/克干,随后逐渐增加,后期又有下降。根表和根内也呈现这种趋势。苜蓿根围的真菌、细菌、放线菌等微生物的种类和数量在检测时间内处于稳定的水平,即自然土中接种G-CCBAU83097后对根围其它类群微生物没有明显影响。
3.融合子F17的生理生化测定结果大多与HL29更相近,16SrRNA序列与HL29的同源性更高,为89.68%,初步鉴定融合子F17属于芽孢杆菌属。
4.融合子F17对22种植物病原真菌和6株植物病原细菌有不同抑制活性,其抑菌谱与HL29有很高的一致性。融合予F17对苜蓿根腐病有很好的防治效果。共生试验中,在植株地上和地下部分重量、固氮酶活性、叶绿素含量等方面均优于对照和其他几个处理。