论文部分内容阅读
蚕豆萎蔫病毒2(Bean broad wilt virus 2,BBWV 2)发生广泛,对许多经济作物造成严重危害。为了建立研究BBWV 2与寄主植物互作关系的实验体系,本文以防虫温室培育20～60d的豌豆幼嫩叶片为材料,进行了豌豆原生质体的分离培养研究,并对酶液配比、酶液pH、酶解时间、渗透压调节条件等作了探索。分离出的原生质体形态饱满浑圆,FDA测定活力良好。采用β微管蛋白一抗(鼠抗)和荧光基团FITC标记的兔抗鼠二抗标记感染BBWV 2和健康的豌豆原生质体微管骨架,用激光共聚焦显微镜进行了观察。用产自新鲜活体叶片的原生质体替代产自愈伤组织的原生质体,研究BBWV 2与寄主之间的互作,更接近事实原貌。研究中并未观察到感染BBWV 2后寄主细胞骨架的特异变化,可能病毒感染不造成寄主细胞骨架的变化,或者变化较小不易观察。建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)在兰花上大面积严重发生,对兰花的经济和观赏价值造成了不可估量的损失。本文研究了兰花上两种主要病毒的检测方法,并对其灵敏度及田间检测实用性进行比较。应用I-ELISA方法和电镜负染法对采自杭州、北京等地区多品系兰花上的CymMV和ORSV进行了检测,并分析比较了I-ELISA,DAS-ELISA和TAS-ELISA三种方法的灵敏度。数据表明两者发病率相似皆较高,但皆有无毒品系存在,应严格控制其传播,避免无毒品系染病。分析I-ELISA和DAS-ELISA及DAS-ELISA等方法所得数据表明,TAS-ELISA在三者之中检测灵敏度最高。应用抗CymMV单克隆抗体建立了快速检测田间样品的免疫斑点法(Dot-ELISA)和组织印迹法(Tissue blot-ELISA),对其田间实用性进行了分析。CymMV单抗稀释3000倍时,Dot-ELISA中病叶粗汁液可被检出的最大稀释度为1:5120。Tissueblot-ELISA中样品一次平切后第1次印迹与Dot-ELISA样品1∶40稀释的结果相当,前4次印迹均可获得满意的显色效果。Tissue blot-ELISA的灵敏度低于Dot-ELISA,但Tissue blot-ELISA操作方便,更适宜田间应用。