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背景和目的:原发性肾病综合征(Primary nephrotic syndrome,PNS)是中国儿童最常见的肾脏疾病,也是导致慢性肾功能不全的主要原因之一。PNS患儿的肾小球滤过屏障异常导致大量蛋白尿、低蛋白血症和水肿。目前,PNS的病因尚未清楚。许多研究发现PNS的病因可能与T细胞功能紊乱或者T细胞反应异常有关。尽管有文献报道PNS患儿存在Th1/Th2、Th17/Treg免疫失衡,但导致Th细胞免疫失衡的机制尚不清楚。γδT细胞占外周血T细胞1-5%,其T细胞表面受体(T cell receptor,TCR)由γ链和δ链组成。与αβT细胞不同,γδT细胞可以非主要组织相容性复合体限制方式识别抗原,感知受损的细胞或感染的细胞。人类的γδT细胞能参与固有免疫和适应性免疫,对Th17细胞的分化有重要的作用,抑制Treg细胞的免疫抑制功能,诱导向Th1或Th2表型发生免疫反应。许多研究显示γδT细胞在抗感染、抗肿瘤以及自身免疫性疾病中发挥作用。因此,γδT细胞作为连接固有免疫和适应性免疫的“纽带”,可能在调控CD4+T细胞免疫反应发挥着关键的作用。有报道γδT细胞与肾脏损伤有关。缺乏γδT细胞的肾毒性肾炎模型鼠仅产生少量的蛋白尿和肾脏损害;新月体性肾小球肾炎模型鼠体内,由肾脏γδT细胞合成分泌的IL-17A可能加重肾脏损害;缺乏γδT细胞的缺血再灌注模型鼠较野生型小鼠的肾小管损伤明显减少。有报道称γδT细胞与肾脏疾病的免疫调控有关。有研究发现肾脏注射李斯特氏菌的小鼠γδT细胞明显增多,缺乏γδT细胞可导致肾脏局部损害加重。急性Heymann肾炎和阿霉素诱导肾功能衰竭模型鼠体内γδT细胞可产生大量的TGF-β1。有研究发现γδT细胞在Ig A肾病进展为肾功能衰竭过程中可能发挥作用。但是γδT细胞在PNS中的作用研究甚少。本实验的研究目的在于探讨γδT细胞及其亚群调控PNN患儿外周血Th17细胞和Treg细胞免疫平衡的机制。课题组既往研究发现与正常对照组相比,PNS患儿外周血PBMC中RORγ和IL-23p19的m RNA表达水平及Th17细胞水平均显著增高,IL-21是Th17合成分泌的细胞因子之一,因此本实验将IL-23和IL-21纳入研究。第一部分:γδT细胞及其亚群对PNS患儿Th17/Treg免疫平衡的影响目的:探讨γδT细胞、IL-23R+γδT细胞、IL-17+γδT细胞在儿童单纯性原发肾病综合征(PNS)患儿外周血中对于Th17/Treg免疫平衡的影响。方法:选择确诊的64例初发PNS患儿为研究对象,其中51例急性期单纯性肾病综合征(SNS),13例恢复期单纯性肾病综合征(RM-SNS);收集21例正常体检儿童外周血(Control)。采用流式细胞术检测外周血中γδT细胞、IL-23R+γδT细胞、IL-17+γδ细胞、Th17细胞和Treg细胞的百分比;同时对γδT细胞、IL-23R+γδT细胞、IL-17+γδ细胞与Th17细胞、Treg细胞和Th17/Treg的比值进行相关性分析。结果:与正常组相比,急性期SNS组中Th17细胞水平显著升高(P<0.05),Treg细胞水平显著降低(P<0.05),Th17/Treg的比值显著增高(P<0.05);恢复期SNS组中Th17、Treg以及Th17/Treg比值均无明显统计学差异。与正常组相比,急性期SNS组外周血γδT细胞、IL-23R+γδT细胞、IL-17+γδT细胞百分比均显著升高(P<0.05);恢复期SNS组IL-23R+γδT细胞水平明显增高(P<0.05),γδT细胞、IL-17+γδ细胞水平均无统计学意义(P>0.05)。进一步发现γδT细胞、IL-17+γδT细、胞IL-23R+γδT细胞与Th17细胞、Th17/Treg的比值呈现正相关关系(P<0.05),IL-23R+γδT细胞水平与Treg细胞呈负相关关系(P<0.05)。结论:γδT细胞及其亚群可能参与调控儿童单纯性PNS体内Th17/Treg免疫平衡。第二部分IL-23-γδT-Th17/Treg轴在PNS的发生、发展及转归中的作用目的:探讨IL-23-γδT细胞调控单纯性PNS患儿外周血Th17/Treg免疫平衡的免疫学机制。方法:将SNS患儿外周血单个核细胞分为如下4组:(1)空白对照组、(2)IL-23刺激组、(3)IL-23拮抗剂组(4)IL-21抗体组。利用流式细胞术检测Th17、Treg、γδT细胞以及γδT细胞分泌IL-17和IL-21的水平。结果:与(1)空白对照组相比,(2)IL-23刺激组Th17细胞水平明显上升(p<0.05),Treg细胞水平明显下降(p<0.05),Th17/Treg比值明显升高(p<0.05),γδT细胞水平明显上升(p<0.05),细胞内合成IL-21的γδT细胞水平明显上升(p<0.05),细胞内合成IL-17的γδT细胞水平无明显差异(p>0.05)。与(2)IL-23刺激组相比,(3)IL-23拮抗剂组Th17细胞水平明显下降(P<0.05),Treg细胞水平明显上升(P<0.05),Th17/Treg比值明显下降(P<0.05),γδT细胞水平明显下降(P<0.05),IL-21+γδT细胞水平明显下降(P<0.05),IL-17+γδT细胞水平无显著性差异(P>0.05);(4)IL-21抗体组Th17水平明显下降(P<0.05),Treg水平明显上升(P<0.05),Th17/Treg明显下降(P<0.05),γδT细胞水平明显下降(P<0.05),合成分泌IL-21的γδT细胞水平有下降趋势,但无统计学差异(p>0.05),IL-17+γδT细胞水平无显著性差异(P>0.05)。γδT细胞水平与Th17水平呈正相关关系(P<0.05),与Treg水平呈负相关关系(P<0.05),与Th17/Treg呈正相关关系(P<0.05)。IL-21+γδT水平与Th17水平呈正相关关系(P<0.05)与Th17/Treg呈正相关关系(P<0.05)。IL-17+γδT细胞水平与Th17或Treg细胞水平均无明显相关性。结论:γδT细胞可能通过合成分泌IL-21对Th17/Treg免疫平衡进行调控,参与单纯性SNS的发生发展。中和IL-23和(或者)中和IL-21可能会成为治疗SNS的新治疗的靶点。