【摘 要】
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硫酸盐还原菌（Sulfate-reducing bacteria,SRB）是一类在自然界和人体中普遍存在的非光合厌氧菌,其通过电子传递偶联磷酸化产生能量。SRB可利用硫酸盐离子作为呼吸氢或氢的末端电子受体,将硫酸盐离子还原生成硫化氢等硫化物,在调节肠道组织稳态和炎症方面有重要作用。常驻肠道微生物革兰氏阴性菌脱硫弧菌属（Desulfovibrio）细菌Desulfovibrio fairfielde
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（批准号:31970746,31771514）； 中央高校基本科研业务费专项资金（批准号:JUSRP21824,JUSRP22029）；
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硫酸盐还原菌（Sulfate-reducing bacteria,SRB）是一类在自然界和人体中普遍存在的非光合厌氧菌,其通过电子传递偶联磷酸化产生能量。SRB可利用硫酸盐离子作为呼吸氢或氢的末端电子受体,将硫酸盐离子还原生成硫化氢等硫化物,在调节肠道组织稳态和炎症方面有重要作用。常驻肠道微生物革兰氏阴性菌脱硫弧菌属（Desulfovibrio）细菌Desulfovibrio fairfieldensis（D.fairfieldensis）也属于SRB,并在菌血症、肝脓肿患者体液中分离得到。我们前期研究结果显示肠道过度增殖的Desulfovibrio可能经肠-肝轴造成机体炎症及肝脏纤维化。已有研究表明革兰氏阴性菌分泌的微囊泡（microvesicles,MVs）,作为革兰氏阴性菌生长过程的普遍分泌产物之一,在肠道微生物稳态失调造成疾病的过程中起到重要的调节作用。D.fairfieldensis与宿主疾病进程的关系是否也与其分泌的MVs相关尚未有研究报道,本文从体外厌氧培养的D.fairfieldensis菌液中分离得到MVs,并对其生物学功能进行了探索研究,主要结论如下:（1）本研究从人的粪便中分离得到的单菌株通过分子技术鉴定为D.fairfieldensis。使用超滤膜浓缩法-超速离心法-超滤膜富集式的优化方法提高了MVs富集的效率和质量,且优化的富集方法对MVs的粒径以及形态不会造成影响。从D.fairfieldensis菌液中富集到的MVs呈球状、粒径范围在50-150nm之间。（2）蛋白免疫印迹检测到D.fairfieldensis分泌的MVs中有位于细胞外膜上的膜孔蛋白表达（outer membrane porin F,Omp F）;非靶向定量蛋白组学在D.fairfieldensis中共检测到1496个蛋白,在其分泌的MVs中共检测到916个蛋白。对组成MVs蛋白的预测定位结果显示外膜蛋白、内膜蛋白、细胞周质蛋白、细胞质蛋白均在D.fairfieldensis分泌的MVs中表达。结合相关研究报道Desulfovibrio细菌基因组中普遍存在原噬菌体基因,推测D.fairfieldensis通过爆炸性裂解方式分泌得到的MVs类型为内外膜囊泡（Outer-inner membrane vesicles,OIMVs）。同时还发现MVs与亲本细菌中参与生命活动的蛋白组成有所差异,推测MVs独立于亲本细菌的功能可能与差异蛋白的表达相关。（3）体外研究D.fairfieldensis来源的MVs可能具有的生物学功能发现,其可造成肠上皮细胞Caco-2细胞屏障损伤的作用,并刺激单核细胞来源的巨噬细胞THP-1（THP-1-Mφ）产生炎症反应,并启动细胞焦亡途径诱导巨噬细胞死亡,该炎症反应可活化肝星状细胞（LX-2）,上调LX-2细胞纤维化相关基因的表达,潜在诱导肝纤维化相关疾病。综上所述,D.fairfieldensis可能通过爆炸性裂解分泌OIMVs类型的MVs,OIMVs与亲本细菌的蛋白组成差异导致两者的执行功能不一致;在生物学功能方面,MVs对Caco-2肠上皮细胞屏障有一定的破坏作用,且引起宿主的免疫反应,该免疫反应可能会参与肝纤维化疾病相关的病程。
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