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猪伪狂犬病毒(PRV)与人类单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV1)都属于T型疱疹病毒,为双股线性DNA病毒。PRV在猪群中会引起伪狂犬病也被称为Aujeszky病,得病小猪最终会因病发而死亡。我国自20世纪70年代末从匈牙利引进Bartha-K61疫苗株用于预防伪狂犬病,该病从20世纪90年代至2010年能够得到很好的控制。然而,自2011年开始,随着新型病毒变异株的出现,伪狂犬病也能在Bartha-K61疫苗免疫过的猪群中爆发,给中国猪养殖业带来了巨大的经济损失。因此,包括Bartha-K61在内的传统疫苗都不能有效地预防该病毒在猪群中的扩散,急需开发新的疫苗用于预防该病。HSV1会引起疱疹性龈口炎、疱疹性角膜结膜炎、疱疹性脑膜脑炎。此外,有报道证明HSV1还与阿尔兹海默症(Alzheimerdisease,AD)、帕金森病(Parkinson’s disease,PD)等的致病过程紧密相关。目前,用于预防HSV1的疫苗还未成功开发,研发用于相应有效的疫苗对于阻断HSV1在人群中的传播具有重大意义。CRISPR/Cas9系统是近几年发展起来并广泛用于基因编辑领域的热门工具。我们应用该系统成功敲除了PRV的gE、TK基因,HSV1的gC、TK基因。经噬斑纯化获得3种PRV弱毒株,分别为gE基因缺失弱毒株(PRV-gE-)、TK基因缺失弱毒株(PRV-TK-)、gE和TK双基因缺失弱毒株(PRV-gE-/TK-);2种HSV1弱毒株,分别为gC基因缺失弱毒株(HSV1-gC-)、TK基因缺失弱毒株(HSV1-TK-)。经细胞与动物实验证明,PRV-gE-、PRV-TK-、PRV-gE-/TK-毒力依次减弱;HSV1-gC-、毒力强于HSV1-TK-,但两者毒力均弱于野生型病毒。进一步通过使用PRV-TK-、PRV-gE-/TK-、HSV1-TK-弱毒株分别免疫小鼠,小鼠都能抵抗致死剂量野生型病毒的攻毒。PRV-gE-、HSV1-gC-注射小鼠后都对小鼠的脑病部造成较大损伤。因此,PRV-TK-、PRV-gE-/TK-、HSV1-TK-弱毒株可用作疫苗生产的候选毒株,而PRV-gE-、HSV1-gC-由于毒力过强不适合作为疫苗生产候选毒株。