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哺乳动物体细胞核移植是一项复杂而有序的操作过程。本文从不同方面研究了绵羊卵母细胞的体外成熟、孤雌激活以及重构胚的构建过程,建立了一套比较稳定的核移植体系,其结果如下: 1. 分析了EGF 不同添加量、FSH:LH 的不同配比和不同大小卵泡的卵泡液对绵羊卵母细胞的体外成熟的影响。结果表明:(1)添加30ng/ml EGF 显著高于其他试验组的成熟率(85.0% vs 60.0%, 71.7%, 72.7%, P﹤0.05),并可提高绵羊孤雌激活胚的囊胚发育率;(2)成熟液中添加FSH 1μg/ml,LH 5.0IU/ml成熟率最高;(3)在绵羊卵母细胞成熟液中添加3%绵羊大卵泡液,在成熟率上极显著高于小卵泡液的20%添加组(78.6% vs 36.5%,P﹤0.01),显著高于小卵泡液的3%添加组和未添加组(78.6% vs60.0%, 67.5%, P<0.05)。2. 比较了不同发育时期卵母细胞进行OPS 玻璃化冷冻效果及其对以后发育的影响。研究发现,成熟培养0h(GV 期)、16h、24h、26h的卵母细胞玻璃化冷冻、解冻后形态正常率差异不显著(P>0.05),培养24h卵母细胞冷冻保存后,卵裂率、囊胚率与培养0h、16h、26h试验组差异显著(38.3% vs 13.3%、26.7%、28.3%;13.0% vs 0%、6.3%、5.9%,P<0.05),而培养16h、26h两个试验组之间差异不显著(P>0.05)。结果表明:成熟培养24h的卵母细胞OPS玻璃化冷冻效果最好,成熟培养16h、26h 次之,而不经过成熟培养的卵母细胞玻璃化冷冻效果最差。3. 研究了不同化学激活方法对绵羊孤雌生殖胚胎发育的影响。在囊胚率上,Ionomycin联合6-DMAP 与联合6-DMAP +CB差异不显著,而与联合CB 组差异显著(P<0.05),与单独Ionomycin 激活差异极显著(P<0.01);乙醇联合6-DMAP+CB与联合6-DMAP、CB 差异显著(P<0.05),而与单独乙醇激活差异极显著(P<0.01)。结果表明: Ionomycin+6-DMAP 、Ionomycin+6-DMAP +CB与乙醇+6-DMAP +CB在绵羊卵母细胞孤雌激活上都可获得较好的效果,其中以乙醇+6-DMAP +CB组为最佳。4. 比较了不同电激活参数对绵羊孤雌生殖胚胎发育的影响。结果发现:1.2 Kv/cm 的直流脉冲具有最佳激活效果,与1.6 Kv/cm 组差异不显著,但与0.8 Kv/cm、2.0 Kv/cm 组在卵裂率、囊胚率上差异显著。脉冲次数3 次效果最好,其卵裂率、囊胚率显著高于2 次脉冲( P<0.05 ),与1 次脉冲差异极显著(P<0.01)。