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目的：构建稳定、高表达的Twist基因真核表达质粒载体,研究Twist基因在恶性肿瘤细胞侵袭中的作用及其机制。方法：①以质粒pcDNA4/myc-His A-Twist为模板采用PCR技术获取Twist基因全长编码框架,运用双酶切、定向克隆技术将目的片段亚克隆入质粒pTracer-CMV/BSD,构建质粒pTracer-CMV/BSD-Twist。②培养SW480结肠癌细胞株,运用Lipofectamine 2000转染SW480结肠癌细胞,实验分组：质粒pTracer-CMV/BSD-Twist组、质粒pTracer-CMV/BSD组和未转染组。③转染48小时后收获细胞,运用荧光实时定量PCR技术检测三组细胞Twist基因的mRNA表达水平；Wester blot技术检测三组细胞的Twist蛋白表达水平。④采用Transwell小室模型检测三组癌细胞的侵袭能力。结果：①经双酶切、基因测序等检测方法证实,本实验成功构建Twist基因真核表达质粒载体pTracer-CMV/BSD-Twist。②倒置荧光显微镜下观察转染48小室肿瘤细胞可见质粒pTracer-CMV/BSD-Twist组和质粒pTracer-CMV/BSD组表达绿色荧光蛋白的细胞,强度高而密集。③荧光实时定量PCR检测三组细胞Twist基因mRNA表达水平,结果显示质粒pTracer-CMV/BSD-Twist组Twist基因mRNA表达水平高于质粒pTracer-CMV/BSD组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.01),而质粒pTracer-CMV/BSD组和未转染组比较Twist基因mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。④Western blot检测三组细胞Twsit蛋白表达水平,结果显示质粒pTracer-CMV/BSD-Twist组Twist蛋白表达水平高于质粒pTracer-CMV/BSD组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.01),而质粒pTracer-CMV/BSD组和未转染组比较Twist蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。⑤Transwell小室模型检测三组细胞侵袭能力,结果显示质粒pTracer-CMV/BSD-Twist组细胞侵袭能力高于质粒pTracer-CMV/BSD组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.01),而质粒pTracer-CMV/BSD组和未转染组比较细胞侵袭能力差异无统计学意义(P>0.05)。结论：①成功构建Twist基因真核表达质粒载体pTracer-CMV/BSD-Twist,并证实转染肿瘤细胞后可表达Twist基因的mRNA和蛋白质。②Twist基因在恶性肿瘤细胞侵袭中发挥了重要的促进作用,Twist基因高表达可显著增强恶性肿瘤细胞的侵袭能力。