论文部分内容阅读
近年来,随着鲟鱼养殖品种的不断增加、养殖规模的不断扩大与集约化程度的不断提高,养殖鲟鱼的病害问题日趋严重,暴发性死亡事件时有发生,造成重大经济损失。细胞系是水生动物病毒病原分离鉴定、病原生物学、致病机理、疫病诊断技术、疫苗制备与免疫预防技术等研究的重要实验材料。目前,国外利用已经建立的鲟鱼细胞系发现或报道了鲟科鱼类的多种病毒病原,而国内仅见少数几个鲟科鱼类细胞培养的初步研究,鲟科鱼类细胞系资源十分缺乏。匙吻鲟是鲟鱼养殖的重要品种之一,建立来源于匙吻鲟组织的细胞系,可为鲟鱼病毒病原分离鉴定与防控技术研究奠定重要的实验材料基础。采用组织块移植培养技术,对来源于匙吻鲟鳍条组织的细胞进行原代培养,建立了匙吻鲟鳍条组织的细胞系,已稳定传代培养80多代,定名为PF-Fin;匙吻鲟鳍条组织细胞系为成纤维样细胞系,能够在含10%血清的MEM培养基生长增殖;对匙吻鲟鳍条细胞进行液氮冷冻保存,保存8个月后经台盼兰染色检验,约87.68±3.61%的细胞仍保持活性。冻存的细胞经复苏培养,细胞贴壁迅速、形态均一、生长旺盛。PF-Fin传代培养细胞在四种不同培养基(M199、MEM、R1640、L15)、四种不同血清浓度(0%、5%、10%、20%)以及四种不同温度(15℃、20℃、25℃、30℃)条件下的生长特性研究结果表明,M199培养基、10%血清、25℃温度为PF-Fin细胞系的最适培养条件;PF-Fin细胞系的集落形成效率为13.75±2.28%;PF-Fin细胞系的染色体分析结果显示,第5代PF-Fin细胞系的染色体数目为2n=120,第59代PF-Fin细胞系的染色体数众数为90,染色体数目发生了明显变化。病毒敏感性试验结果表明,PF-Fin细胞对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)、斑点叉尾鮰呼肠孤病毒(CCRV)和鲤鱼春季病毒血症病毒(SVCV)敏感,可产生典型细胞病变效应(CPE);应用PF-Fin细胞系分离鲟鱼病毒的研究正在进行中。