【摘 要】
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目的:旨在于研究双氢青蒿素（DHA）诱导前列腺癌细胞焦亡并对其可能的机制进行深入探讨。方法:（1）采用CCK-8检测DHA作用前列腺癌PC-3以及DU145细胞的增殖情况。（2）透射电镜和扫描电镜观察细胞焦亡现象。（3）Caspase-1表达检测和乳酸脱氢酶（LDH）释放检测验证细胞膜的连续性是否中断。（4）ELISA法检测细胞外白介素（IL）-18和IL-1β表达水平。（5）流式细胞术Annex
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目的:旨在于研究双氢青蒿素（DHA）诱导前列腺癌细胞焦亡并对其可能的机制进行深入探讨。方法:（1）采用CCK-8检测DHA作用前列腺癌PC-3以及DU145细胞的增殖情况。（2）透射电镜和扫描电镜观察细胞焦亡现象。（3）Caspase-1表达检测和乳酸脱氢酶（LDH）释放检测验证细胞膜的连续性是否中断。（4）ELISA法检测细胞外白介素（IL）-18和IL-1β表达水平。（5）流式细胞术Annexin V-PI双染对细胞焦亡比例进行定量。（6）生物信息学分析寻找正常前列腺细胞与前列腺癌细胞的表达差异基因。（7）选用地西他滨（DAC）作阳性对比,亚硫酸氢盐测序法检测凋亡相关斑点样蛋白（ASC）的甲基化状态。（8）采用实时荧光定量PCR检测焦亡通路中相关基因的m RNA表达水平的变化,以及蛋白免疫印迹法观察焦亡通路中相关基因的蛋白表达水平变化。（9）构建PC-3裸鼠种植瘤模型,对比肿瘤生长状况。（10）采用蛋白免疫印迹法观察组织的蛋白水平改变情况并结合透射电镜验证体外实验的实验结果。结果:（1）CCK-8结果显示DHA明显抑制PC-3以及DU145细胞增殖。（2）透射电镜和扫描电镜在超微结构上观察到DHA处理后的细胞呈现焦亡样的死亡形态改变。（3）细胞外Caspase-1、LDH水平明显升高提示细胞膜破裂。（4）ELISA结果显示,细胞外的炎症因子表达水平升高。（5）流式细结果显示DHA作用下细胞膜破裂导致PI+细胞定量增多。（6）生物信息学分析显示ASC在前列腺癌中表达明显受限。（7）DHA对抑癌基因ASC的去甲基化效果明显优于DAC。（8）实时荧光定量PCR结果显示,DHA处理后焦亡通路相关基因的m RNA表达水平明显升高。蛋白免疫印迹结果显示,DHA处理后焦亡通路相关基因的蛋白表达水平明显也升高。（9）测量PC-3裸鼠种植瘤的最终体积发现,相比于对照组,DHA治疗后的药物组肿瘤生长明显得到抑制。（10）组织中焦亡相关基因的表达上调及透射电镜观察肿瘤组织发生细胞焦亡形态学改变均与体外实验一致。结论:DHA能抑制前列腺癌细胞增殖,上调焦亡相关基因表达以及恢复抑癌基因ASC的甲基化状态,诱导细胞焦亡。
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