论文部分内容阅读
海藻是海洋生物中的一大类群,由于其特殊的生活环境,能够代谢产生大量结构独特多变且活性特殊多样的代谢产物,是化学和生物活性多样性研究的重要对象之一。我国海域辽阔,海藻资源丰富,适合寻找结构新颖、生理活性独特的先导化合物,应加强对海藻资源的开发利用。植物病原菌的危害已成为农业减产的严重威胁之一,由于农药的大量使用,不仅使整个生态环境受到极大的污染,而且很多农业病虫害由于长期的抗农药过程中形成了各种各样的耐药性与抗药性。然而,新化学农药的农药遗留问题严重,开发费用高,加之陆生动植物化学资源已被充分利用,继续寻找新的活性更强的农药已越来越困难。而海藻中蕴藏着各种各样、结构新颖独特、活性卓越显著的化合物,是寻找新的农药的宝贵资源。另外,用化学生态学的方法从海洋生物中提取天然防污物质成为近年来解决海洋污损生物问题的新思路,其目标是寻找高效无毒的防污材料取代原有的对海洋环境有严重危害的化学合成防污材料。因此,海藻活性物质能为天然防污材料提供良好的防污模板化合物。本研究的目的是从青岛沿海4株海洋红藻(包括粗枝软骨藻、海头红、鸭毛藻及松节藻)中运用现代色谱分析中的TLC和HPLC进行代谢产物丰富度筛选,以5株农业病原菌和4株海洋细菌作为供试菌株对其不同极性组分的代谢产物进行初步的生物活性筛选,并对优势藻种运用色谱分离纯化和现代波谱分析方法进行初步的化学成分研究和生物活性研究,以其发现对农业和天然防污有效的组分和单体模板化合物。本论文得到结论如下:1、将采自青岛沿海的4株海洋红藻鉴定和干燥后,粉碎过筛、室温超声萃取、乙醇浸提和旋转蒸干的浸膏,再用乙酸乙酯-水等体积萃取、获得的乙酸乙酯相用石油醚-乙酸乙酯和二氯甲烷-甲醇体系梯度洗脱。综合薄层层析分析和高效液相色谱分析,筛选出松节藻是优势藻种,代谢产物最为丰富。2、初步生物活性筛选:以两性霉素B为阳性对照,在农业病原真菌抑制活性筛选中,发现这四株海洋红藻仅对五株农业真菌中的三株真菌:HJ(花生菌核菌)、XK(西瓜枯萎菌)和MZ(马铃薯早疫菌)表现出一定的抑制活性,且HJ抑菌圈最大为7.5mm(鸭毛藻Fr3,阳性对照为9.5mm);XK抑菌圈最大为9.0mm(松节藻Fr3,阳性对照为10.0mm),接近阳性对照,鸭毛藻Fr7和松节藻Fr4抑菌圈为8.5mm;MZ抑菌圈最大为10.0mm(松节藻Fr3,阳性对照为12.5mm);均为中等强度的抑制活性,但是松节藻对农业病原真菌的抑制作用较强,且松节藻Fr3组分表现出较好的真菌抑制活性。以氯霉素为阳性对照,在海洋细菌抑制活性筛选中,发现四株海洋红藻对供试的四株海洋细菌均表现出了一定的抑制活性。其中EC(大肠埃希氏杆菌)的抑菌圈最大为15.0mm(海头红Fr4,阳性对照为25.0mm);SA(金黄色葡萄球菌)的抑菌圈最大为15.0mm(松节藻Fr3,阳性对照为23.0mm);BT(苏云金芽孢杆菌)的抑菌圈最大为15.0mm(海头红Fr3、鸭毛藻Fr3、松节藻Fr3,阳性对照为22.0mm);BS(枯草芽孢杆菌)抑菌圈最大为15.0mm(海头红Fr3和松节藻Fr3,阳性对照为24.0mm);由此可见,松节藻和海头红对海洋细菌的抑制作用较大,且松节藻Fr3和海头红Fr3组分表现出较好的海洋细菌抑制活性。3、综合利用各种色谱分离纯化方法和现代波谱学技术,从松节藻中共分离出了10个化合物,鉴定其中一个化合物为胆甾醇(3-β-羟基胆甾-5-烯,3-beta-hydroxyl-cholest-5-en)。4、松节藻的10个单体化合物抑菌活性测定:10种化合物对供试的5株农业真菌无抑菌活性;化合物5对苏云金芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌有抑菌活性,抑菌圈分别为10.5mm和11.5mm,和阳性对照相比较低;化合物9对供试的4株海洋细菌均有抑菌活性,抑菌圈分别为15.0mm、12.0mm、20.0mm、和23.0mm,其中对苏云金芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈和阳性对照相当(阳性对照为22.0mm和24.0mm)。