【摘 要】
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冬虫夏草为我国青藏高原地区名贵的中草药,是一种虫菌复合体,其生长受到多种环境因子的制约。目前温度、光照等环境因子对冬虫夏草的影响已见报道,但水分对其生长发育的影响研究资料未见报道。本研究以人工培养基上培养的冬虫夏草菌为材料,通过在培养基中添加3.8%Na Cl来模拟水分胁迫下冬虫夏草菌生长发育情况,并设计不同水分胁迫处理时间实验组。以正常处理组(O)为对照组,水分胁迫5天处理组(Y5)、水分胁迫1
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冬虫夏草为我国青藏高原地区名贵的中草药,是一种虫菌复合体,其生长受到多种环境因子的制约。目前温度、光照等环境因子对冬虫夏草的影响已见报道,但水分对其生长发育的影响研究资料未见报道。本研究以人工培养基上培养的冬虫夏草菌为材料,通过在培养基中添加3.8%Na Cl来模拟水分胁迫下冬虫夏草菌生长发育情况,并设计不同水分胁迫处理时间实验组。以正常处理组(O)为对照组,水分胁迫5天处理组(Y5)、水分胁迫10天处理组(Y10)、水分胁迫20天处理组(Y20)和水分胁迫30天处理组(Y30)的冬虫夏草菌菌落为实验组,显微镜下观察菌丝形态,转录组测序分析差异表达基因,对照组及Y20组利用代谢组分析差异代谢产物,从菌落菌丝形态、生理生化以及分子三个层面探究水分胁迫对冬虫夏草菌生长发育的影响,旨在为冬虫夏草菌的培养提供初步的水分条件依据。主要结果如下:1.随着水分胁迫下处理时间的延长,冬虫夏草菌形态学特征有着显著差异:菌落生长受到明显抑制,菌落最外圈菌丝呈现白色透明状,表面无气生菌丝生长,菌丝扭结加粗,呈网络状排列,未见明显分生孢子及产孢结构。2.水分胁迫处理后冬虫夏草菌菌丝体中多糖、尿素、甘露醇及多酚含量均呈现先增加后减少的趋势,其中甘露醇含量在水分胁迫处理30天后又重新积累,腺苷含量在水分胁迫处理后显著下降。3.转录组测序结果显示,处理5天时冬虫夏草菌基因表达即开始出现差异;处理10天时差异基因表达量达到峰值;处理20天时差异基因表达量相较处理10天时有所下降,但下调基因的数目达到最大值;处理30天时差异表达量下降,并逐渐趋于稳定。4.差异基因的功能注释,结果显示水分胁迫对冬虫夏草菌膜的组成部分影响最大,多糖含量的变化可能与α-半乳糖苷酶相关基因表达有关,甘露醇含量的变化可能与甘露醇-1-磷酸5-脱氢酶等相关基因的表达有关,多酚含量的变化可能和苯丙氨酸解氨酶相关基因表达相关,尿素含量的变化与精氨琥珀酸合成酶相关基因的表达有关而腺苷含量的变化与5’-核苷酸酶相关基因表达有关。5.水分胁迫下,冬虫夏草菌通过MAPK通路级联反应激活CAT1,过氧化物酶体及热激蛋白家族帮助机体抵抗逆境。6.差异代谢物的功能注释结果显示,水分胁迫处理对亚油酸代谢、α-亚麻酸代谢及花生四烯酸代谢影响最大,甜菜碱及氨基酸类物质是水分胁迫下冬虫夏草菌的渗透调节物质。7.通过转录组-代谢组的联合分析找到了影响多糖含量变化的半乳糖代谢途径、尿素含量变化的精氨酸合成途径以及L-多巴含量变化的酪氨酸途径。
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