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目的:
在急性早幼粒细胞白血病(Acute promyelocytic leukemia, APL)中，出凝血异常和特征性融合基因（（PML/RARo）是两大突出特征，出凝血障碍包括DIC及原发性纤溶亢进，这主要归因于白血病细胞分泌过高的组织因子及AnnexinⅡ。目前明确的观点认为APL原发性纤维蛋白溶解亢进是由于APL细胞中异常高表达的AnnexinⅡ所致，而未有文献报道PML/RARo融合基因和AnnexinⅡ的关系，本研究旨在阐明PML/RARo融合基因和AnnexinⅡ之间的调控关系，进而构建含AnnexinⅡ启动子的双荧光素酶报告基因质粒，以进一步揭示PML/RARo融合基因调控AnnexinⅡ表达的分子机制。
方法:
1.体外培养PR9细胞，Zn2+诱导PR9细胞0、0.5、1、2、6、12、24h，应用RT-qPCR和Western blot技术分别在转录及蛋白水平检测上述时间点PR9细胞AnnexinⅡ的表达情况。
2.按照启动子截短分析策略，将AnnexinⅡ基因5侧翼的序列长度按不同段AnnexinⅡ启动子片断构建到荧光素酶报告基因质粒中(-1074bp～+46bp,-641bp～+46bp,-374bp～+46bp,-198bp～+46bp,-91bp～+46bp),并通过双酶切及测序确定质粒的正确性。
3.将正确构建重组质粒pGL3-AnnexinⅡ-promoter用脂质体法转染入COS-7细胞，分析PML/RARα融合蛋白与AnnexinⅡ启动子转录活性。
结果:
1.Zn2+诱导PR9细胞1小时后PML/RARo融合蛋白开始表达，AnnexinⅡ2小时开始升高，提示PML/RARα融合蛋白能诱导AnnexinⅡ的异常高表达并呈现时相关系。
2.荧光素酶报告基因分析发现，PML/RARα融合蛋白表达能激活AnnexinⅡ启动子的转录活性。
结论:
急性早幼粒细胞白血病的特征性PML/RARα融合蛋白可以诱导AnnexinⅡ的异常高表达;同时成功构建了含AnnexinⅡ启动子的荧光素酶报告基因质粒。研究发现PML/RARα融合蛋白可以激活AnnexinⅡ启动子的转录活性，为进一步深入研究AnnexinⅡ启动子的转录调控机制奠定了良好的实验基础。