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真菌毒素是由真菌产生的次级代谢有毒产物,其中AFB1、AFB2、AFG1、 AFG2及OTA不仅毒性大而且污染广泛。中药材从种植、采收到贮藏极易受到真菌毒素的侵害,不经控制而被使用后会造成更加严重的危害。因此,有必要建立准确、灵敏、可靠、简便的检测方法监控中药中真菌毒素的污染水平,以保证中药用药安全并为制定相应的限量标准提供依据。本课题通过查阅文献和预实验,针对鸦胆子和生姜等应用广泛且污染频率较高的中药,建立了黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A的检测方法,主要研究内容如下:1、建立了免疫亲和柱净化-高效液相色谱-在线柱后光化学衍生-荧光法测定中药鸦胆子中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2及质谱确证样品以甲醇-水溶液提取,经免疫亲和柱净化-高效液相色谱-在线柱后光化学衍生-荧光检测器(IAC-HPLC-PCD-FLD)检测,并对阳性样品进行HPLC-MS/MS确证。AFB1、AFB2、AFG1、AFG2分别在0.50-50.00、0.15~15.00、0.50~50.00、0.15~15.00ng/mL范围内线性关系良好,检测限分别为0.08、0.015、0.06、0.02μg/kg,平均加样回收率为74.3%-100.8%。阳性样品AFB1和AFs的污染水平分别为0.26~22.89和0.31±27.52μg/kg。本实验首次建立了中药鸦胆子中黄曲霉毒素检测的方法,并对阳性样品进行了质谱确证。与中国药典中方法相比,该方法操作简单、准确性高、可靠性强,适用于对鸦胆子中黄曲霉毒素污染的监控。2、建立了免疫亲和柱净化-超高效液相色谱-荧光法快速同时检测中药生姜中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2和OTA及质谱确证样品以甲醇-水溶液提取,经免疫亲和柱净化后,用超高效液相色谱-荧光检测器(IAC-UPLC-FLD)进行快速检测,并以HPLC-MS/MS对阳性样品进行确证。AFB1、AFB2、AFG1、AFG2和OTA平均加样回收率为75.2%-99.7%,检测限分别为0.04、0.04、0.10、0.07和0.25μg/kg。阳性样品AFB1和OTA的最大污染量分别为6.50和20.66μg/kg,同时对阳性样品进行了质谱确证。该方法快速、准确、简便,可用于生姜中AFs和OTA的快速检测。3、建立了分子印迹固相萃取柱净化-超高效液相色谱-荧光法快速检测生姜中OTA的方法及质谱确证样品采用乙腈-水溶液提取,经MIP-SPE柱净化后,以UPLC-FLD检测。OTA在1.00~100.00ng/mL范围线性关系良好,回收率为87.6%-94.5%,检测限和定量限分别为0.09和0.30μg/kg。经过再生处理后,分子印迹固相萃取柱可被重复使用41次。在优化的UPLC条件下,样品分析时间仅需3.3min。该方法简便快速、经济可靠,适用于生姜中OTA污染的快速检测。