大肠杆菌PC<'+>PE<'->菌株的构建及其生理生化性质研究

来源 :湖北大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chzhao2005
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将莱姆螺旋菌Borrellia afzelii编码磷脂酰胆碱合成酶的基因(pcs)插入ptac85质粒tac启动子的下游构建成重组质粒ptac85-pcs,然后通过电转化法将ptac85-pcs质粒导入缺乏磷脂酰乙醇胺(PE)的AD93菌株并筛选获得AD93/ptac85-pcs(PC+PE-)菌株。AD93/ptac85-pcs菌株在加有50mM MgCl2和1%胆碱的LB培养基中生长时能有效合成磷脂酰胆碱(PC),在大肠杆菌活体中实现了磷脂酰胆碱替代磷脂酰乙醇胺。同时构建了对照菌株AD93/ptac85-pss(PE+)和AD93/ptac85-mcs(PE-)。比较AD93/ptac85-pss、AD93/ptac85-pcs和AD93/ptac85-mcs菌株的生长需求和耐受性发现:(1)AD93/ptac85-pcs菌株在Mg2+浓度大于10mM时即可生长,而AD93/ptac85-mcs菌株则需要Mg2+浓度大于20 mM才能生长,AD93/ptac85-pss菌株的生长不需要额外添加Mg2+;(2)AD93/ptac85-pcs菌株与AD93/ptac85-mcs菌株一样,耐受SDS的MIC值为0.02%,比AD93/ptac85-pss菌株小10倍;(3)4% NaCl完全抑制AD93/ptac85-pcs菌株的生长,但3% NaCl则完全抑制AD93/ptac85-mcs菌株的生长,而NaCl浓度高达5%时AD93/ptac85-pss菌株仍能生长,12小时培养后OD600值仍达0.5。以上实验结果说明,在细菌活体内磷脂酰胆碱不能完全取代磷脂酰乙醇胺,磷脂酰胆碱替代磷脂酰乙醇胺改变细菌的生理生化特性。通过对巨噬细胞的吸附与被吞噬差异的比较,发现AD93/ptac85-pcs菌株被吞噬率最低,表明PC的存在对细菌逃避宿主先天性免疫攻击有明显的作用。
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