背景及研究目的:瑞芬太尼作为临床麻醉中常用的阿片类镇痛类药物,众多研究已经证实其在调节机体的免疫和炎症反应中的作用。本课题组的前期研究发现,β-arrestin2作为G蛋白偶联受体的重要负调节因子,介导TLR4通路从而参与瑞芬太尼的肝保护作用。本研究的目的是探究瑞芬太尼预处理对于70%部分肝脏切除术诱导的肝再生过程的作用及其具体机制,为临床瑞芬太尼的围术期应用提供更多的依据及支持。方法:1.瑞芬太尼预处理对于70%部分肝脏切除术后肝再生过程的影响方法:本实验动物为6-8周龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠,分别予以30μg/kg瑞芬太尼或同等剂量生理盐水腹腔注射预处理后,在70%部分肝脏切除术后6h、24h、36h、48h、120h、192h计算各组肝体比,Ki-67免疫组化染色反映肝脏细胞再生情况,HE染色、TUNEL染色及肝功能检测反映肝脏损伤程度,RTPCR检测糖异生及脂肪酸合成过程中重要因子、肝再生过程的部分相关细胞因子的mRNA水平,Western blot检测120h肝脏中功能性Yap的蛋白表达。在离体细胞水平上,给予不同浓度的瑞芬太尼处理小鼠原代肝细胞,经正常培养或缺氧复氧培养后CCK8检测细胞活力。结果:与生理盐水对照组相比,瑞芬太尼预处理组70%部分肝脏切除术后48h及120h小鼠的肝体比均显著升高,Ki-67阳性细胞数量自36h明显增加并持续高于对照组。HE及TUNEL结果表明,在70%部分肝切除术诱导的肝再生过程中,没有出现明显的肝脏结构损伤及细胞凋亡,而瑞芬太尼预处理也没有明显降低转氨酶的水平。此外,瑞芬太尼参与了对于肝脏代谢及再生过程中细胞因子的调节,且部分肝切除术后120h瑞芬太尼预处理组再生肝脏中功能性Yap的含量显著增加。细胞培养CCK8检测发现,在低浓度瑞芬太尼预处理及在缺氧复氧培养条件下,瑞芬太尼预处理可明显改善细胞活力。2.β-arrestin2通过调节功能性Yap的表达介导瑞芬太尼促进肝再生的过程方法:Western blot检测肝脏、肝细胞及其他组织中μ阿片受体的表达,并使用5mg/kg纳曲酮腹腔注射阻断阿片受体以验证阿片受体在瑞芬太尼促进肝再生过程中的作用。检测β-arrestin2基因敲除小鼠70%部分肝脏切除术后48h Ki-67免疫组化染色情况;提取β-arrestin2基因敲除及野生型小鼠的原代肝细胞,在正常培养或缺氧复氧条件下培养并予以不同浓度的瑞芬太尼处理,CCK8检测细胞活力。使用siRNA敲减/腺病毒转染过表达AML12细胞系中β-arrestin2的表达,并用50ng/ml的瑞芬太尼预处理,Western blot检测Yap及p-Yap的表达。结果:Western blot结果显示肝脏及肝细胞中均表达μ阿片受体;纳曲酮腹腔注射可拮抗瑞芬太尼促进肝再生的作用。β-arrestin2基因敲除小鼠再生肝脏的细胞体积明显增加,这种影响可能通过抑制Yap的降解起作用。离体细胞实验结果表明,β-arrestin2参与了瑞芬太尼预处理对于缺氧复氧损伤肝细胞的保护作用。结论:1.瑞芬太尼预处理可促进70%肝脏切除后的肝再生和改善缺氧复氧后肝细胞的活力。2.瑞芬太尼通过β-arrestin2影响Yap通路介导的肝再生过程。