狗过敏原Can f6表达纯化及在狗过敏中国儿童中的致敏率分析

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背景:狗过敏是全球常见的现象。目前在中国,人们对接触狗而引起的过敏的情况了解的远远不够,特别是中国儿童,经常性的接触宠物狗,属于狗过敏患者的好发群体。目的:在我们的研究中,我们选择了属于lipocalin蛋白家族的主要狗过敏原Can f 6来研究其在中国狗过敏儿童中的致敏情况。方法:首先将Can f 6的基因亚克隆到p ET-28a载体中,随后转化至大肠杆菌BL21(DE3)细胞中进行表达。通过镍亲和层析得到纯化的重组Can f 6;然后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳来验证Can f 6的纯化效果,最后通过嗜碱性粒细胞活化实验和通过免疫印迹实验来检测重组Can f 6在中国狗过敏儿童中的致敏率。此外,我们利用一系列生物信息学方法预测了Can f 6的二级结构、B细胞表位,以及根据预测的信息进行了3D建模,并通过酶联免疫吸附试验法来验证B细胞表位的活性。结果:我们通过SDS-PAGE得到重组的Can f 6的分子量为20k Da。通过免疫印迹实验发现56.3%(18/32)的中国狗过敏儿童患者对Can f 6过敏。嗜碱性粒细胞激发试验的结果显示狗过敏儿童的CD63和CCR3的表达比健康受试者高了约4倍。在二级结构方面,Can f 6含有3个α-螺旋和9个β-折叠。所预测的5个Can f 6的B细胞表位通过ELISA实验成功验证出活性。结论:Can f 6是中国狗过敏儿童的主要过敏原,这个结果对中国儿童狗过敏症状的诊断和治疗提供依据。Can f 6的B细胞表位以及二级结构等信息将有助于为将来设计针对Can f 6相关过敏的疫苗和治疗方法奠定基础。
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