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目的:本研究拟探讨miR-106b~25簇在结肠癌中发挥抑制肿瘤增殖及转移作用的分子机制 方法:荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人结肠癌组织和细胞中miR-106b~25簇各成员表达情况。构建hsa-pre-miR-106b~25簇表达载体,pcDNA3.1(+)-miR-106b~25。瞬转miR-106b~25簇载体或每个成员microRNA mimic和相应inhibitor实现其在结肠癌细胞系的过表达或敲减并鉴定。利用细胞迁移芯片培养板在实时细胞监测仪(RTCA)的迁移实验和铺基质胶的Transwell实验观察miR-106~25对结肠癌细胞的迁移和侵袭能力的影响;应用细胞增殖芯片培养板在RTCA的增殖监测、MTT实验和克隆形成实验检测miR-106~25对结肠癌细胞增殖能力的影响。生物信息学软件预测miR-106b~25的靶基因Smad7、Smad6、BAMBI。qTR-PCR和Western blot检测miR-106b~25对靶基因表达量的影响。构建靶基因3 UTR表达载体,荧光素酶活性实验验证靶基因与miR-106~25成员的靶向关系。经生物信息学和qRT-PCR表达筛选预测miR-106b~25与信号通路相关性,选择Wnt/β-catenin信号通路,qRT-PCR检测其关键分子β-catenin、axin、 c-myc和cyclinD1表达受miR-106b~25簇调控情况。Western blot及免疫荧光法检测miR-106b~25对β-catenin蛋白水平的调控作用。免疫组化法检测靶基因Smad7、Smad6、BAMBI及β-catenin在结肠癌组织中的表达情况。 结果:本研究中发现,相对正常粘膜组织,miR-106b~25簇在结肠癌组织中呈低表达。人为过表达miR-106b~25簇可以抑制结肠癌侵袭、迁移及增殖能力。其中miR-106b对侵袭和迁移能力影响明显,而miR-93和miR-25对增殖能力影响明显。抑制miR-93可以显著促进HCT116的增殖和克隆形成能力。经荧光素酶活性实验证实miR-106b~25簇均可靶向Smad7的3UTR,BAMBI和Smad6分别与miR-106b和miR-93存在靶向关系。此外,分别通过核酸及蛋白水平检测miR-106b~25簇对β-catenin、axin、c-myc和cyclinD1表达影响的分析,提示miR-106b~25簇可以下调Wnt/β-catenin通路。该簇中miR-93对β-catenin下调最为显著,miR-106b对axin上调作用最显著。 结论:综上所述,本研究首先发现了miR-106b~25簇能够抑制结肠癌的侵袭、迁移和增殖能力。证实了该簇可能通过靶向Smad7抑制Wnt/β catenin信号通路传导,同时伴随该簇对其他靶点的如Smad6和BAMBI的调控,提示miR-106~25簇可能参与了多靶点的网络调节最终在结肠癌中发挥了抑制肿瘤发生的作用。因此,miR-106b~25簇可能成为结肠癌治疗潜在的新靶点。