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产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia Coli, ETEC)是引发仔猪、牛犊、羔羊等农场家畜(禽)水样腹泻的最主要致病菌之一,其高发病率和致死率给畜牧养殖业造成很大经济损失。ETEC的致病机理与其两种保护性抗原密切相关：肠毒素(entero toxins)和粘附素(adhesins),肠毒素有耐热型(heat-stable)和不耐热型(heat-labile)两种,粘附素,也称为菌毛(pili),介导ETEC粘附于家畜小肠粘膜上皮细胞微绒毛上,菌毛有多种血清型,最常见的有K88、K99、987P、F41等,而987P+ETEC是仔猪腹泻的主要病原菌之一本研究将987P+ETEC菌毛FasA亚单位的基因fasA构建到原核表达载体上,表达FasA亚单位,经亲和层析获得纯化的FasA亚单位,免疫小鼠,分析其免疫原性,为研制以双歧杆菌为表达载体的新型ETEC细菌载体活疫苗做基础研究。第一部分：PCR扩增987P+ETEC的fasA基因,连接到原核表达载体pQE-30上,构建重组原核表达载体pQE-30-fasA,转化大肠杆菌表达菌E.coli M15, IPTG诱导表达FasA亚单位,SDS-PAG电泳确定蛋白的表达形式、条件和效率。用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒分离纯化蛋白,透析复性浓缩后,于-70℃冰箱保存。第二部分：用纯化后的FasA亚单位免疫BALB/c小鼠,制备抗FasA的抗血清,用ELISA法检测抗血清效价,分析FasA亚单位免疫原性。本研究成功构建了FasA亚单位的重组表达载体pQE-30-fasA经IPTG诱导,FasA亚单位获得高效表达。免疫BALB/c(?)(?)鼠所制备的抗血清效价为1：125000,表明FasA亚单位对小鼠有很好的免疫原性,为进一步研制以双歧杆菌为表达系统的新型ETEC细菌载体活疫苗奠定了基础。