论文部分内容阅读
目的探讨IL-15基因转染联合肿瘤抗原负载的新型前列腺癌树突状细胞疫苗(IL-15/lysate-DC)的免疫生物学特性。方法1.以小鼠肾脏cDNA为模板用pfx DNA ploymerase扩增mIL-15目的基因,将扩增得到的mIL-15目的基因片段克隆到pGEM-T Easy Vector上,得到mIL15-T克隆载体。从mIL-15-T克隆载体上EcoRI酶切得到mIL-15基因,连接到pShuttle-GFP-CMV载体上组装成pShuttle-GFP-mIL-15,再转移到pAdxsi载体上,得到Ad-GFP-mIL-15病毒质粒,并完成腺病毒的大量扩增和纯化。2.从C57BL/6小鼠骨髓分离树突状细胞(dendritic cells,DCs)前体细胞,经rmGM-CSF、rmIL-4诱导分化制备骨髓源性DC。光镜下观察形态学变化,流式细胞仪检测未成熟DC表面共刺激分子表达。收集培养的第5天未成熟DC,通过Ad-GFP-mIL-15转染联合RM-1前列腺癌细胞裂解产物(lysate)上清共同修饰DC,制备IL-15/Lysate-DC疫苗。流式细胞仪检测IL-15/Lysate-DC疫苗细胞表面共刺激分子表达。检测IL-15/Lysate-DC瘤苗刺激同基因型T淋巴细胞增值能力、诱导CTL及其杀伤肿瘤细胞活性。结果1.将所构建的Ad-GFP-mIL-15病毒质粒经酶切、电泳、测序及RT-PCR鉴定证实病毒质粒构建正确,插入片段包含mIL-15基因序列。2.经流式细胞仪检测IL-15/Lysate-DC疫苗DC细胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40、CD11c及MHC-Ⅱ分子表达上调。其细胞表面共刺激分子CD80、CD40与其它各组DC比较差异有显著性(P<0.05)。IL-15/Lysate-DC疫苗刺激同基因T淋巴细胞增殖能力明显增高,较GFP/Lysate-DC、Lysate-DC差异有显著性(P<0.05)。诱导CTL及其杀伤肿瘤细胞活性实验结果提示IL-15/Lysate-DC疫苗对于特异性杀伤肿瘤细胞作用优于Lysate-DC疫苗及GFP/lysate-DC疫苗(P<0.05)。结论成功构建了含mIL15基因的Ad-GFP-mIL-15病毒质粒;IL-15/Lysate-DC可以有效上调DC表面特异性共刺激分子表达,促进DC成熟;IL-15/Lysate-DC可以有效刺激同基因型T细胞增值能力;能诱导特异性CTL分化并对RM-1细胞有显著杀伤作用。